目的研究陶瓷羟基磷灰石(ceramic hydroxyapatite,CHT)I型和II型对2种单克隆抗体(monoclonal Ab,m Ab)1和2聚集体的去除工艺。方法层析仪为AKTA AVANT 150,层析柱为Tricon 10/50,先进行CHT I、CHT II 2种填料的动态载样量研究,然后选取合适的载量进行分离纯化研究。上样条件为5 mmol/L磷酸二氢钠(Na H2PO4),p H 6.5,上样,然后用10 mmol/L Na H2PO4,p H6.5和10 mmol/L Na H2PO4,2 mol/L Na Cl,p H 6.5梯度洗脱来分离单体和聚集体。用分子尺寸排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)测定上样蛋白溶液和洗脱峰单体及聚集体的含量。使用20 cm高的XK 16/40的层析柱进行工艺放大研究。结果 m Ab 1在CHT I型的载量为40 mg/m L,去除后单体含量为98.6%,工艺收率为92.5%;m Ab 2在CHT I型的载量为45 mg/m L,去除后单体含量为98.8%,工艺收率为91.5%;m Ab 1在CHT II型载量为16 mg/m L,去除后单体含量为99.8%,工艺收率为91.8%;m Ab 2在CHT II型载量为20 mg/m L,去除后单体含量为99.9%,工艺回收率为92.2%。结论 2种类型的陶瓷羟基磷灰石填料在聚集体含量高于10%的情况下,都有很好的去除能力,去除结果符合法规要求。该方法操作简单,能够很顺利的进行工艺放大,满足中试和生产需求。
