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猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR鉴别被引量：2: 2018年; 为建立一种快速鉴别猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的方法,根据猪伪狂犬病毒(PRV)全基因序列,并参照SA215、Bartha-K61疫苗株基因缺失位点特征,在单一检测野毒株与疫苗株的基础上,针对g E、g B和TK基因设计引物,首次建立了同时检测猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR检测方法。通过一次PCR检测能区分感染野毒株、疫苗株SA215和Bartha-K61,且与猪圆环Ⅱ型病毒(PCV-2)、细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。多次试验证明该方法简单、可靠且敏感度高,可用于科学研究和临床诊断等方面。; 姜子义李碧蔡瑶颜久淇龚双燕樊毅黄剑波朱玲徐志文; 关键词：PRV 多重PCR 疫苗株变异株

PEDV乳汁黏膜免疫研究进展被引量：5: 2017年; 猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是一种急性、高度传染性的猪肠道疾病,其特征是哺乳仔猪水样腹泻,呕吐,脱水后死亡,特别是10日龄下仔猪,具有极高的发病率和死亡率。该病于1971年在英国首次暴发并报道,其病毒学病因在1978年确定[3],病原是猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）,PEDV是冠状病毒科内的α-冠状病毒属的成员。; 许思遥李萍姜子义吕雯婷樊毅赵军徐志文朱玲; 关键词：PEDV 乳汁黏膜免疫 DIARRHEA 冠状病毒科冠状病毒属

伪狂犬病毒gE、gI和US9三基因缺失株的构建: 2017年; 伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)是一种疱疹病毒,在自然界具有极广泛的宿主类群,是中国养猪业发展主要威胁之一。为了研究病毒的神经传导机制,实验采用Lipofectamine3 000转染试剂,将PP63质粒与伪狂犬病毒Fa株基因组DNA共转染BHK-21细胞,空斑筛选得到gI/gE/US9重组缺失病毒,并命名为SA215-T。采用PCR、基因测序、Western Blot、电镜检查和生长曲线测定等方法检测重组病毒PRV-SA215-T。研究结果显示,Western Blot未发现gE基因的表达,SA215-T株的电镜形态与野毒株无明显差异,SA215-T株与亲本毒株Fa株在细胞中的生长曲线差异不明显且均达到了较高的病毒滴度。; 樊毅李碧郭万柱李萍黄剑波杨凡姜子义赵军许思遥邓益超殷玥毛汐语吕雯婷徐志文朱玲; 关键词：重组病毒基因缺失

免疫组化检测伪狂犬病毒感染大鼠后在其组织中分布规律的研究: 2017年; 伪狂犬病毒(PRV)能够感染神经元细胞并且跨突触传播,该特性使它成为了一种新兴的神经示踪病毒。为探究PRV在动物体内分布情况,本研究构建了PRV人工感染大鼠模型,通过免疫组化技术检测了PRV在大鼠体内各组织器官中的增殖分布情况,同时还将免疫组化检测结果与PCR检测结果相比较。结果表明利用免疫组化技术分别在PRV感染72 h、78 h、84 h、96 h、104 h、108 h后开始依次在大鼠的脑、肺、肾、脾、肝、心检测到PRV。同时在总计36个PRV检测样品中,PCR检测的检出率为50%,免疫组化检测的检出率为36%,两者的符合率为72%。本研究利用免疫组化技术观察PRV感染大鼠后在体内增殖分布规律和病变程度,为进一步探索RV的组织嗜性以及机体抗病毒作用机制奠定基础。; 樊毅刘洪亮李萍黄剑波杨凡姜子义赵军许思遥邓益超殷玥毛汐语吕雯婷杨泽晓徐志文朱玲; 关键词：伪狂犬病病毒大鼠模型免疫组化

猪繁殖与呼吸综合征病毒四川株的分离鉴定及Nsp2生物信息学分析被引量：3: 2016年; 为了解四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况及分子特征,本研究选用2012—2014年四川省不同地区采集并诊断为PRRSV阳性的病料,以Marc 145细胞进行病毒分离,经蚀斑纯化,病毒基因扩增、测序后与NCBI现有序列进行比对分析并通过构建系统进化树等方法研究分离株的分子特征。共成功分离到10株PRRSV,分析证明所有分离毒株均是高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)株,序列比对显示,其中SC2012、SC2012-2株Nsp2部分基因与众多HP-PRRSV株核苷酸同源性在91%~97%之间,与经典毒株CH-1a株同源性为72.9%,与所有BLAST毒株相比存在新缺失位点,与CH-1a、BJ-4株相比,在Nsp2蛋白485 aa^498 aa处存在14个连续氨基酸缺失,其他8株均含30个不连续氨基酸缺失。氨基酸同源性比对显示,SC2012、SC2012-2株高变区与国内分离株同源性介于61.5%~97.2%之间。通过TCID50法测得SC2012、SCSN2012-1、SCSN2012-2、SCCD2012、SCLS2012、SCMY2012、SCBZ2012、SCXC2012、SCXJ2012和SC2012-2病毒毒价分别为10^(-5.41)/m L、10^(-6.5)/m L、10^(-7.29)/m L、10^(-6.41)/m L、10^(-5.5)/m L、10^(-7.67)/m L、10^(-6.29)/m L、10^(-6.8)/m L、10^(-7.41)/m L和10^(-6)/m L。以上结果表明,本研究所分离的SC2012、SC2012-2株是新变异毒株,为四川省PRRSV分子流行病学和遗传变异研究奠定了一定基础。; 毛汐语周远成赵军殷玥吕雯婷邓益超樊毅许思遥朱玲徐志文; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2 生物信息学

胸膜肺炎放线杆菌血清7型菌株体内外培养转录差异的研究: 2017年; 为揭示胸膜肺炎放线杆菌血清7型菌株在体内外培养转录的差异,将该菌培养至对数期采用滴鼻的方式攻毒SPF级昆明小鼠,取小鼠肺组织及菌体纯培养物采用Illumina Hi Seq2500高通量测序平台对该菌在体内外培养的转录差异进行转录组测序(RNA-Seq)分析。结果显示,小鼠肺组织中获取该菌的Clean reads与指定参考基因组的比对效率达15.68%,体外培养菌体的比对效率为97.99%;以后者转录组为对照,共筛选出差异表达基因(DEG)333个,其中上调基因113个,下调基因220个,挖掘新基因6个。对DEG进行GO、COG及KEGG等分析可见,DEG主要富集在能量的产生与转化、碳水化合物转运和代谢、无机离子转运与代谢、氨基酸转运与代谢等方面,主要集中在碳代谢、ATP结合蛋白转运蛋白、嘌呤代谢、氨基酸的生物合成、硫代谢等通路上。本研究对胸膜肺炎放线杆菌血清7型菌株在SPF昆明小鼠体内及体外培养转录差异进行了分析,一定程度上揭示了该菌的致病机制,为后续胸膜肺炎放线杆菌血清7型菌株致病机制的研究提供了依据。; 李萍樊毅殷玥赵军黄剑波徐志文朱玲; 关键词：胸膜肺炎放线杆菌转录组学差异基因

猪流行性腹泻病毒逃逸宿主天然免疫的研究进展被引量：4: 2018年; 猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是一种肠道α冠状病毒,靶向猪小肠上皮细胞,使得小肠上皮组织被破坏,肠道充血,肿胀,引起猪群水样腹泻,导致育肥猪厌食和体型消瘦。其中哺乳仔猪死亡率高。2010年后,随着新的PEDV变异毒株出现,PED再一次在全球暴发,特别是亚洲国家,造成了严重的经济损失。机体的先天免疫并不能完全抵抗PEDV对机体的侵害,因此了解PEDV通过影响干扰素（Interferon,IFN）的产生来逃逸先天性免疫的途径十分必要,同时也为治疗PEDV感染以及研发PEDV疫苗提供了思路。; 徐雷赵军樊毅杨晓宇朱玲; 关键词：猪流行性腹泻病毒逃逸先天免疫

猪嵴病毒和猪星状病毒及猪环曲病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用被引量：7: 2015年; 根据猪嵴病毒(PKV)3D基因、猪星状病毒(PAstV)ORF2基因和猪环曲病毒(PToV)M基因的序列,设计了3对引物,通过反应体系和条件的优化,首次建立了检测猪嵴病毒、猪星状病毒和猪环曲病毒的多重RT-PCR。本研究建立的多重RT-PCR对PKV、PAstV和PToV的最低检出限分别为1.51×104、1.19×103、1.26×104 copies/μL,同时也具有较强的特异性和良好的重复性。用该方法检测了40份来自四川省部分猪场的仔猪腹泻病样。结果显示,PKV、PAstV、PToV的阳性检出率分别为75.0%、30.0%和22.5%。与单一RT-PCR检测结果一致。本方法的建立对PKV、PAstV、PToV的鉴别诊断和混合感染检测具有重要的应用价值。; 顾凡周远成黄剑波樊毅赵洲乔小改朱玲刘书亮徐志文; 关键词：多重RT-PCR

中东呼吸综合征疫苗研究进展被引量：1: 2016年; 中东呼吸综合征(Middle East respiratory syndrome,MERS)是由中东呼吸综合征冠状病毒(MERS Coronavirus,MERS-CoV)引起的一种呼吸系统疾病。目前该病已经蔓延到全球25个国家,造成1400余人感染,近500人死亡,并有4个国家报道骆驼感染MERS病例。研发相关疫苗成为预防该病非常重要的措施。研究人员在病毒载体、重组蛋白、DNAs、纳米粒子、MERS-CoV重组的基础上进行了大量的候选疫苗开发,其中一些还在实验动物身上进行了效果试验。本文就当前一些候选疫苗研究进展进行总结概括,以期更多人力物力投入到研发安全有效的疫苗当中。; 樊毅姜子义李萍邓益超黄剑波朱玲徐志文; 关键词：动物模型疫苗

一例藏香猪混合感染猪流行性腹泻病毒与圆环病毒2型的报告被引量：1: 2016年; 2016年3月四川九寨沟某藏香猪养殖基地出现10余例仔猪死亡案例,临床症状主要表现为呕吐,腹泻,水样稀便及消瘦,病程短,病死率高,呈典型病毒病症状。剖解发现小肠大面积充气,肠壁明显变薄,肠系膜淋巴结充血肿大,肾脏有大量出血点,腹股沟淋巴结充血肿大。采集病料进行实验室RT-PCR、PCR检测,结果为猪流行性腹泻病毒和圆环病毒2型阳性。结合临床症状、病理解剖特征及实验室检测结果,确诊为猪流行性腹泻病毒与圆环病毒2型混合感染。; 索朗扎西许思遥杨凡李雨濛樊毅文军朱玲徐志文; 关键词：藏香猪猪流行性腹泻病毒圆环病毒2型

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樊毅

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