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胶质瘤干细胞辐射抗性机制的研究进展被引量：1: 2016年; 肿瘤是包含不同表型和功能的肿瘤细胞的混合物。在已发现的诸多类型肿瘤中，脑肿瘤是中枢神经系统的重大疾病，通常可以造成患者颅内压升高，压迫脑组织，导致神经系统功能障碍，严重威胁着患者的生命。目前，针对脑肿瘤的治疗手段主要包括手术治疗结合化疗和放疗的方法。由于脑肿瘤侵袭性生长的特点，手术不能达到完全切除的效果；化疗效果由于血脑屏障影响了抗癌药物的充分转运及肿瘤的耐药性而不明显；放射治疗是最主要的术后辅助治疗手段，; 董瓅瑾樊嵘; 关键词：胶质瘤干细胞微环境

PCGF1过表达慢病毒载体的构建及稳定过表达A549细胞系的建立被引量：1: 2016年; 目的构建人多梳家族环指蛋白1(PCGF1)基因的慢病毒载体,建立稳定表达PCGF1基因的细胞系。方法根据人PCGF1序列设计并合成引物,以A549细胞c DNA为模板,PCR扩增目的基因。双酶切目的基因并插入p LVXIRES-puro质粒,对重组质粒进行慢病毒包装,用包装好的病毒感染A549细胞系,通过嘌呤霉素筛选阳性表达细胞,Western blotting验证PCGF1表达情况。结果重组质粒经测序分析正确,瞬时转染293T细胞后,Western blotting验证PCGF1表达明显升高。包装慢病毒颗粒后感染A549细胞,经嘌呤霉素筛选后,Western blotting验证得到PCGF1稳定过表达的A549细胞系。结论成功构建了p LVX-IRES-PCGF1-puro慢病毒过表达载体和PCGF1稳定过表达的A549细胞系,为进一步研究PCGF1的功能奠定了基础。; 闫睿樊嵘董瓅锦赵正源; 关键词：转染; 全文增补中

NSPc1-siRNA重组慢病毒的构建及其对U87细胞NSPc1基因的沉默效应: 2014年; 【目的】构建包装NSPc1-si RNA慢病毒颗粒,并在U87胶质瘤细胞中鉴定其感染及基因沉默效果。【方法】根据Gen Bank中基因信息,采用干扰序列设计软件设计靶点,制备合成GV118-si RNA目的质粒,转化感受态细胞,对于长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和对比分析,重组病毒质粒与另外2种辅助包装载体质粒通过Lipofectamine TM2 000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度;并检测病毒颗粒在目的细胞U87胶质瘤细胞中的感染效率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blotting方法检测NSPc1 si RNA慢病毒对U87中NSPc1的干扰作用。【结果】成功构建NSPc1 si RNA慢病毒载体GV118-si RNA,重组病毒滴度为4×108TU/ml;用该病毒体外感染U87胶质瘤细胞,当感染复数(MOI)为10时,感染效率大于90%;RT-PCR和Western blotting方法检测NSPc1基因沉默的效率分别为66.4%、60.0%。【结论】成功构建了NSPc1 si RNA慢病毒载体GV118-si RNA,该重组病毒包装后在体外感染U87胶质瘤细胞的效率较高,且具有显著的基因沉默效果。; 樊嵘李辉沈静龚燕华; 关键词：NSPC1 SIRNA 慢病毒载体 U87细胞

利用CRISPR/Cas9系统构建PCGF1基因敲除MCF7稳定细胞系被引量：1: 2017年; 【目的】构建PCGF1(Polycomb Group Ring Finger 1)基因敲除的MCF-7稳定细胞系。【方法】以PCGF1序列为模板,设计sgRNA干扰序列,两端加入载体连接序列。通过DNA片段合成所需sgRNA序列。退火形成oligo二聚体序列后,使用T4 DNA连接酶重组干扰序列与pCAG-T7-Cas9-pgk-Puro-T2A-GFP质粒。测序鉴定后,将pCAG-T7-Cas9-gRNA-pgk-Puro-T2AGFP重组载体通过脂质体转染MCF7细胞系。通过嘌呤霉素进行阳性克隆筛选,Western blotting检测PCGF1表达。【结果】测序结果显示构建的重组载体序列正确。转染筛选后,western blotting验证构建的MCF7细胞系PCGF1表达明显降低。【结论】利用pCAG-T7-Cas9-pgk-Puro-T2A-GFP质粒,成功构建PCGF1敲低载体。转染MCF7细胞系,通过嘌呤霉素筛选和western blotting验证得到PCGF1稳定敲低的MCF7细胞系。; 闫睿樊嵘董瓅瑾赵正源; 关键词：乳腺癌

神经系统多梳蛋白1在神经系统来源细胞中的表达及促增殖作用被引量：1: 2012年; 目的检测神经系统多梳蛋白1(NSPc1)基因在神经系统来源的细胞中亚细胞定位及表达水平,探索NSPc1基因表达水平与神经系统来源的细胞增殖能力的关系。方法使用细胞免疫荧光与激光共聚焦技术检测人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系中内源性的NSPc1蛋白及外源过表达的绿色荧光蛋白-NSPc1融合蛋白的亚细胞定位情况。使用流式细胞术检测NSPc1基因过表达对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系细胞周期的影响。使用实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测正常人脑组织与16例不同世界卫生组织分级的人胶质瘤样品中NSPc1基因的mRNA表达水平差异。结果 NSPc1蛋白主要定位于SH-SY5Y细胞的细胞核。过表达NSPc1显著增加SH-SY5Y细胞处于S期的细胞比例,而减少G2期的比例。人胶质瘤样品中NSPc1基因的mRNA平均表达水平高于正常人脑组织。结论NSPc1基因的高表达能促进神经系统来源的细胞增殖,NSPc1高表达可能与胶质瘤恶性度相关。; 李辉樊嵘龚燕华; 关键词：神经胶质瘤

多梳蛋白Nspc1对微管基因Tubulin βⅢ启动子活性的影响被引量：1: 2015年; 【目的】克隆TubulinβIII基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中并检测多梳蛋白Nspc1对其活性的影响。【方法】提取小鼠畸胎瘤细胞系P19的DNA,PCR扩增TubulinβIII近端启动子片段,构建2个不同长度的p GL3basic-TubulinβIII荧光素酶报告基因载体,双酶切及测序确定所扩增的DNA序列,将重组的报告基因载体与转录调控因子多梳蛋白Nspc1瞬时共转染小鼠畸胎瘤细胞系P19细胞,使用双荧光素酶报告基因检测系统检测Nspc1对TubulinβIII启动子活性的影响。【结果】鉴定结果表明构建的TubulinβIII启动子序列正确,P19细胞中双荧光素酶活性实验表明构建的报告基因具有启动子活性,并对转录调控因子Nspc1有应答。【结论】成功构建了TubulinβIII荧光素酶报告基因载体,为进一步在多能干细胞分化模型中研究多梳蛋白Nspc1对TubulinβIII基因的表达调控机制奠定了重要基础。; 李辉樊嵘正午孙奕龚燕华; 关键词：荧光素酶报告基因转录活性

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樊嵘