李正国
- 作品数:4 被引量:7H指数:2
- 供职机构:安徽农业大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金国家教育部博士点基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域:农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 茶愈伤组织实时定量PCR分析中内参基因的选取被引量:3
- 2014年
- 为了选取合适的内参基因来分析培养基中前体物诱导及对照的茶愈伤组织中茶氨酸代谢相关基因的差异表达,利用Gen Bank上登录的茶树基因序列以及通过构建文库测序所得的基因(具有完整的阅读框)共7个持家基因设计引物。在分析这些引物的扩增效率和特异性后,测定了它们在茶愈伤组织生长过程中(对照和愈伤培养基中添加含氮外源物的情况下)的表达水平。利用ge Norm和Norm Finder软件分析了这些持家基因的稳定性,确定在该条件下合适的内参基因为β-actin和GAPDH。
- 史成颖李正国徐乾宛晓春
- 关键词:实时定量PCR内参基因基因表达茶树
- 一种茶氨酸合成酶基因及其制备茶氨酸的方法
- 本发明公开了一种茶氨酸合成酶基因及其制备茶氨酸的方法,所述合成酶的基因cDNA全长为2886bp,阅读框长度为2532bp,所述基因cDNA序列如SEQ ID No.1所示。该茶氨酸合成酶基因可用于合成制备茶氨酸。具体方...
- 宛晓春史成颖李正国徐乾李海婧佘广彪方从兵孙俊陈琪张正竹杨华
- 文献传递
- 茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析被引量:4
- 2017年
- 在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1)。结果显示:(1)GS1-2基因全长为1 710bp,开放阅读框长1 071bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子质量为39.3kD,理论等电点为5.65;核酸序列分析表明,GS1-2基因与从安吉白茶中克隆的茶氨酸合成酶基因相似性为99%。(2)将GS1-2基因克隆至原核表达载体pET-32a和pMAL-c5x,转化至大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,pET-32a-CsGS1-2转至Rosetta中诱导表达的蛋白与预测蛋白大小一致,主要以包涵体形式存在;而pMAL-c5x-CsGS1-2转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达可产生可溶性蛋白。(3)进一步构建茶树GS1-2酵母表达载体pYES-DEST52-CsGS1-2并转化至酿酒酵母(WAT11)菌液中,添加底物(谷氨酸钠100μmol/L和盐酸乙胺500μmol/L)震荡培养并离心,UPLC-MS测定酶反应产物结果初步表明,目的蛋白不能催化盐酸乙胺和谷氨酸钠合成茶氨酸,但可以合成谷氨酰胺。
- 史成颖李正国徐乾李海婧汤之近邓威威宛晓春
- 关键词:茶树谷氨酰胺茶氨酸酵母表达
- 茶树中茶氨酸合成相关基因的功能验证研究
- 茶氨酸(γ-N-乙基-谷氨酰胺)是茶树中特有的游离氨基酸,也是茶叶中生津润甜的主要成分,对人体具有降血压、改善睡眠、提高免疫力等生理作用。 茶氨酸作为一种一般认为安全的成分被广泛应用于食品与药用行业,传统上通过茶叶天然...
- 李正国
- 关键词:茶树谷氨酰胺合成酶
- 文献传递