何黎
- 作品数：1 被引量：6H指数：1
- 供职机构：新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123的克隆、表达及鉴定被引量：6
- 2017年
- 目的构建细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123基因原核表达载体,诱导表达并鉴定EgM123蛋白。方法提取pET41b-EgM123重组质粒,以此为模板PCR扩增EgM123基因片段,克隆至原核表达载体pET28a中,经限制性内切酶双酶切和测序鉴定。将重组菌质粒转化大肠埃希菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,采用SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,Western blot鉴定其免疫反应性。结果 PCR扩增EgM123基因片段长度为594bp,经酶切分析和测序鉴定证明pET28a-EgM123原核表达载体构建正确。重组质粒转化BL21在37℃条件下,经IPTG(终浓度为0.4mmol/L)诱导3h,获得分子质量单位约为29ku的EgM123蛋白,与理论值相符。该蛋白能被EgM123-GST免疫兔抗血清识别。结论成功构建了pET28a-EgM123原核表达载体,表达蛋白具有免疫反应性,为研制包虫病疫苗奠定了基础。
- 王慧齐文静何黎郭宝平张文宝李军
- 关键词：包虫病细粒棘球绦虫蛋白表达疫苗
