王莎莎
- 作品数：8 被引量：5H指数：2
- 供职机构：杭州师范大学生命与环境科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科学技术基金浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 褐飞虱可溶性海藻糖酶的分子特性及dsRNA抑制表达分析被引量：2
- 2017年
- 为探究不同昆虫可溶性海藻糖酶的潜在功能,在获得褐飞虱2个可溶性海藻糖酶NlTRE1-1和NlTRE1-2的cDNA全长序列的基础上,采用生物信息学相关软件分析其序列特征以及二级、三级结构等分子特性及生理功能,同时构建不同昆虫海藻糖酶的系统进化树,进一步采用RNAi技术分析单个海藻糖酶基因抑制效果.结果显示,褐飞虱可溶性海藻糖酶NlTRE1-1和NlTRE1-2蛋白相似性高,其蛋白质二级和三级结构均类似,二级结构中含有相似比例的α螺旋、β-折叠和无规卷曲;系统进化树分析表明褐飞虱海藻糖酶与大豆蚜、豌豆蚜和灰飞虱等昆虫的TRE1具有较近的亲缘关系;且两个褐飞虱特异性TRE1-1和TRE1-2的dsRNA注射后48h,本基因的表达极显著下降.研究结果为以抑制海藻糖酶基因表达来进行的害虫防治技术奠定基础.
- 陈坚毅张露王莎莎丁艳娟赵丽娜王世贵唐斌
- 关键词：褐飞虱QRT-PCR
- 浙江临安大明山常见蝴蝶资源种类调查与分析
- 2017年
- 大明山位于浙江杭州临安市,拥有比较丰富的动植物资源。该次调查分别于2014—2016年每年7月上旬,在临安大明山地区的山岭、溪水、果园、农田等地共采集193只蝴蝶,隶属7科。其中以蛱蝶科(Nymphalidae)为主要科,共24种90只,凤蝶科(Papilionidae)11种23只,眼蝶科(Satyridae)11种25只,粉蝶科(Pieridae)5种47只,其他科蝴蝶7种8只,其中包括1只国家二级保护蝴蝶箭环蝶。分析2014—2016年大明山鳞翅目昆虫蝴蝶主要常见种和观赏价值高的种,以及3年间各科蝴蝶种类和数量的动态变化,为大明山的物种多样性保护及蝴蝶资源的开发和保护提供了基础数据和科学依据。
- 王莎莎陈坚毅张露王世贵唐斌
- 关键词：蝴蝶资源蛱蝶凤蝶
- 异色瓢虫酪氨酸羟化酶基因不同发育历期表达及RNAi抑制黑化效果分析被引量：2
- 2019年
- 酪氨酸代谢在昆虫黑色素形成中具有重要的调控作用。本研究为探讨酪氨酸代谢调控异色瓢虫黑色素代谢平衡及其发育的影响,先检测异色瓢虫不同发育阶段酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)基因表达情况,采用RNAi技术对4龄幼虫注射dsTH RNA抑制酪氨酸羟化酶mRNA表达,探索其在蛹期和成虫羽化阶段黑色素形成中的潜在功能。研究结果表明,TH基因在4龄幼虫体内的表达量最高,而在预蛹阶段和羽化后第2天开始表达量显著性下降。其次,dsTH RNA注射后能够显著降低TH本基因的表达,且异色瓢虫4龄幼虫发育缩短,与注射dsGFP RNA组相比较,提前化蛹。最后,dsTH RNA注射后异色瓢虫蛹的重量略有增加,且发育出现异常,即蛹的颜色变化不加深,与对照组相比较,无黑色斑点出现。这些结果表明成虫是在蛹期开始形成黑色素的,及酪氨酸羟化酶能够通过调控酪氨酸代谢途径而影响异色瓢虫化蛹阶段的发育和表皮颜色的变化。相关研究结果有助于丰富酪氨酸代谢调控异色瓢虫表型的内容,为将来保护异色瓢虫,并将其用于害虫生物防治提供理论基础。
- 张道伟王莎莎张萌钱正敏曾伯平唐斌
- 关键词：异色瓢虫酪氨酸羟化酶RNA干扰
- 异色瓢虫丙酮酸激酶基因序列分析及其调控海藻糖代谢功能被引量：1
- 2021年
- 【目的】丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PYK)是一种调节性糖酵解酶,负责调节糖酵解和糖异生之间的平衡,具有重要的生理作用。本研究通过分析异色瓢虫(Harmonia axyridis)3条HaPYK的序列结构,并结合RNA干扰(RNAi)技术,探讨HaPYK在瓢虫体内的生物学功能。【方法】基于从异色瓢虫全基因组中获得的3条HaPYK序列(被分别命名为HaPYK1-1、HaPYK1-2、HaPYK2),通过生物信息学方法分析其理化性质和序列结构,以及与其他昆虫之间的同源性。然后采用显微注射的方法将体外合成的dsRNA导入羽化第1天成虫体内,在注射后48和72 h分别收集试验材料,提取虫体总RNA后进行反转录,随后采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术测定3个HaPYK的表达水平以评估RNAi效果,并检测与海藻糖代谢相关基因的表达水平,最后检测葡萄糖、糖原、海藻糖含量以及两种海藻糖酶的活性。【结果】HaPYK1-1、HaPYK1-2、HaPYK2的开放阅读框分别为1350、1569、1656 bp;蛋白大小分别为449、522、551 aa,理论等电点分别为5.04、5.02、5.01。保守结构域预测表明3条HaPYK均属于Pyruvate_kinase超家族。HaPYK二级结构主要是α-螺旋和无规则卷曲,另外也含有延伸链和β-转角。3条序列的寡聚物类型均为同源四聚体。系统进化树显示,HaPYK与同为鞘翅目的昆虫具有较近的亲缘关系,如马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)和赤拟谷盗(Tribolium castaneum)。注射dsHaPYK1-1后,HaPYK1-2和HaTRE1-4的表达量显著下调,而HaPYK2、HaTRE1-1、HaTRE1-2、HaTRE2-like、HaTPS的表达量显著上调;注射dsHaPYK1-2后,HaTRE1-1、HaTRE1-2、HaTRE1-3、HaTRE1-5、HaTRE2、HaTPS的表达量显著上调;注射dsHaPYK2后,仅HaTRE1-1表达量在48 h表现为显著上调,HaTRE1-3、HaTRE1-4、HaTRE1-5、HaTRE2、HaTRE2-like的表达量均下调。与对照组相比,在dsHaPYK1-2组中48 h时可溶性海藻糖酶(TRE1)活性显著降低,海藻糖和糖原含量显著增加;在dsHaPYK1-1或dsHaPYK2�
- 葛欣竺史宇星王莎莎刘智慧蔡文杰周敏王世贵唐斌
- 关键词：异色瓢虫丙酮酸激酶RNA干扰
- 海藻糖酶基因TRE2-like和TRE2在异色瓢虫羽化过程中的表达与功能
- 2019年
- 【目的】异色瓢虫Harmonia axyridis是一种重要的捕食性天敌昆虫,海藻糖在异色瓢虫的变态发育、羽化等整个生命过程都起着重要的作用。本研究以前期获得的类似膜结合型海藻糖酶(TRE2-like)与膜结合型海藻糖酶(TRE2)基因为基础,探讨在异色瓢虫羽化阶段这两个海藻糖酶的潜在功能,为阐明异色瓢虫从蛹发育到成虫时海藻糖代谢机制提供参考。【方法】根据TRE2-like和TRE2基因序列设计双链RNA(dsRNA)区域片段并合成对应的dsRNA,通过RNAi将其注射到异色瓢虫2日龄蛹中。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RNAi处理后羽化第1天的异色瓢虫成虫糖代谢相关基因的表达;同时采用蒽酮比色法、酶标法等分别测定RNAi处理后羽化第1天的异色瓢虫成虫主要糖类物质含量及TRE活性变化,并观察异色瓢虫羽化后的表型变化。【结果】结果表明,与对照组(dsGFP注射组)相比,异色瓢虫2日龄蛹被注射TRE2-like或TRE2 dsRNA后,其新羽化成虫体内TRE2-like和TRE2表达量均极显著下调,且少数个体出现了蜕皮与翅形成困难等畸形表型。可溶性海藻糖酶活性在注射dsTRE2-like后显著降低,膜结合型海藻糖酶活性在注射dsTRE2后显著降低;注射dsTRE2后糖原含量显著下降,注射dsTRE2-like后糖原和海藻糖含量显著下降,注射dsTRE2-like+dsTRE2后糖原和葡萄糖含量显著下降,且海藻糖含量极显著下降。注射dsTRE2-like, dsTRE2和dsTRE2-like+dsTRE2后可溶性海藻糖酶基因TRE1-1和TRE1-2表达下降或显著下降,而TRE1-5表达上升或显著上升,海藻糖合成酶(trealose-6-phosphate synthase, TPS)、糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase, GP)、糖原合成酶(glycogen synthase, GS)基因的表达均显著下调。【结论】TRE2-like和TRE2基因表达被抑制后,异色瓢虫海藻糖等代谢受到影响。研究结果为探究异色瓢虫体内膜结合型海藻糖酶的潜在功能和调控机制奠定了基础。
- 张道伟李燕张萌王莎莎肖仲久曾伯平倪晓丽唐斌
- 关键词：异色瓢虫海藻糖酶基因表达酶活性RNA干扰
- 丙酮酸激酶基因调控异色瓢虫生殖力的作用分析
- 2022年
- 丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PYK)是昆虫能量代谢过程中的一个关键酶.为探究该基因调控异色瓢虫(Harmonia axyridis)生殖力的功能,采用RNA干扰技术抑制PYK1-1基因的表达,测定产卵前期、30 d总产卵量、孵化率及关键基因的表达水平,并观察卵巢发育情况.将dsPYK1-1导入异色瓢虫成虫体内后,雌虫的产卵前期延长、前20 d总产卵量低于未注射组和注射ds GFP组.相较于未注射组和注射ds GFP组,dsPYK1-1组卵巢发育较迟缓、体型稍小,而卵的孵化率无显著变化.雌虫卵黄原蛋白基因Vg1的表达水平在注射后第3天显著高于ds GFP组,Vg1与Vg2的表达水平在注射后第5天和第7天均显著低于ds GFP组;雌虫卵黄原蛋白受体基因VgR在注射后第5天显著低于ds GFP组.结果表明:PYK1-1能通过能量代谢影响雌虫卵巢发育和Vg与VgR表达,进而调控异色瓢虫生殖力.
- 蔡文杰史宇星晁蕾葛欣竺刘智慧于园仪王莎莎王世贵唐斌
- 关键词：异色瓢虫生殖力RNA干扰
- GLUT基因表达对异色瓢虫幼虫能量代谢的影响
- 2023年
- 异色瓢虫Harmoniaaxyridis是一种重要的捕食性瓢虫,可捕食多种蚜虫及其他害虫。目前,已被世界各地广泛用于农业害虫的生物防治。为实现短时间低成本快速扩繁异色瓢虫,人们对异色瓢虫人工饲料的配方进行了大量研究,使其更好地完成瓢虫的生长发育。实验室前期筛选出添加海藻糖和葡萄糖的人工饲料,能增加幼虫体质量、缩短瓢虫产卵前期、提升产卵量和卵孵化率等,有助于瓢虫的生长发育和繁殖。本文以饲喂蚜虫组为对照组,对2个葡萄糖转运蛋白基因(GLUT1和GLUT4)在异色瓢虫发育各阶段的表达情况进行了研究,并通过RNA干扰技术,进一步探究了注射ds GLUT1或ds GLUT4后异色瓢虫体内能量代谢相关基因的表达情况和酶活性变化,从而证明该基因与异色瓢虫幼虫能量代谢的调节功能密切相关。结果表明:注射ds GLUT1和ds GLUT4显著影响了TPS、TRE2、TRE2-like等基因的表达,同时发现在干扰GLUT1和GLUT4在幼虫体内的表达后,糖原、葡萄糖、海藻糖等糖类物质含量均有所下降。表明GLUT1和GLUT4在异色瓢虫幼虫的繁殖中起到一定的调控作用。研究结果有助于为未来进一步研究关键基因表达与异色瓢虫幼虫能量代谢之间的关系提供理论支持,为合理地利用异色瓢虫进行生物防治提供技术指导和参考依据。
- 葛欣竺李燕顾珊王莎莎晁蕾蔡文杰李航宇方胤杰王世贵唐斌
- 关键词：异色瓢虫人工饲料葡萄糖葡萄糖转运蛋白RNA干扰能量代谢
- 胰岛素受体基因InR调控褐飞虱海藻糖代谢研究
- 2019年
- 在昆虫中已发现成熟的典型胰岛素信号通路,但是其调控海藻糖代谢途径的机制还未清晰。为探讨胰岛素受体基因在褐飞虱海藻糖代谢平衡及其发育的调控作用,本文采用RNAi技术抑制胰岛素受体(InR)基因的表达,测定处理后海藻糖、糖原和葡萄糖含量及海藻糖酶活变化,并检测InR、类胰岛素多肽(Ilp)、海藻糖代谢途径中关键基因的表达。研究结果表明dsRNA注射后能够显著抑制Ilp和InR基因的表达;InR1低表达后72 h能够显著抑制3种糖类物质的含量;InR表达抑制后72 h可溶性海藻糖酶活性上升,而膜结合型海藻糖酶活性下降;当InR表达受抑制后3个海藻糖酶和2个海藻糖合成酶基因的表达都显著下降。这些结果说明InR能够影响海藻糖等糖类物质的平衡。从而为将来通过调控昆虫血糖平衡来控制害虫提供理论依据。
- 王莎莎陈坚毅杨慧利刘永康罗雨嘉邓颖梅王世贵唐斌
- 关键词：褐飞虱胰岛素受体RNA干扰
