李致宏
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 感染家蚕微孢子虫的蚕体血淋巴蛋白质差异表达分析及质谱鉴定
- 2013年
- 昆虫具有高效的先天性免疫系统,血淋巴在免疫过程中发挥重要作用。收集感染家蚕微孢子虫(Nb)后第2、4、6、8天的家蚕幼虫血淋巴,分别以相同发育时期健康家蚕幼虫的血淋巴为对照,进行蛋白质SDS-PAGE电泳分析,寻找家蚕免疫应答Nb侵染的相关蛋白质。结果显示,从感染Nb第6天起,幼虫血淋巴蛋白质组成发生改变,感染第8天的血淋巴样品中出现了3条明显下调的差异蛋白条带。利用线性离子阱质谱技术(Linear Ion Trap Quadrupole,LTQ)鉴定差异蛋白条带,主要有肌动蛋白3(Actin 3)、载脂蛋白(apolipophorin protein)、性别特异储存蛋白2(sex-specific storage-protein 2 precursor)、储藏蛋白(storage protein)、酚氧化物酶亚基(phenoloxidase subunit)、转铁蛋白(transferrin)和热激相关蛋白70(heat shock cognate protein70),这7种蛋白质分别在家蚕的能量代谢、先天性免疫以及蛋白质合成、运输、修复等方面扮演重要角色。家蚕感染Nb后血淋巴中的上述7种蛋白质的表达变化,推测可能会影响蚕体自身对Nb的免疫防卫反应能力。
- 李致宏马振刚李晚军刘军韩冰李田潘国庆李春峰周泽扬
- 关键词：家蚕血淋巴家蚕微孢子虫差异表达蛋白
- 家蚕ML家族基因的鉴定及病原诱导表达特征被引量：3
- 2019年
- MD-2相关脂类识别蛋白(MD-2-related lipid-recognition,ML)家族是一类广泛分布于动物、植物和真菌的含有ML单一结构域的蛋白家族,在先天免疫、脂类识别及代谢过程中发挥重要作用。通过同源检索在家蚕基因组数据库中比对获得4个ML家族成员基因,包括BmNPC2、BmML-1、BmML-2和BmEr-16,克隆其cDNA序列,生物信息学分析表明家蚕ML家族蛋白具有典型的ML结构域和信号肽,并至少含有4个保守的半胱氨酸残基。系统进化分析显示BmNPC2与黑脉金斑蝶的Promoting以及烟草天蛾的MsML-1亲缘关系较近,BmML-2、BmEr-16以及BmML-1与果蝇的NPC2家族蛋白亲缘关系较近。qRT-PCR结果显示ML家族基因在家蚕各组织中均有转录,其中在脂肪体和马氏管中的表达量相对较高。将大肠埃希菌以及球孢白僵菌、黑胸败血芽孢杆菌、核型多角体病毒和家蚕微孢子虫等家蚕病原通过注射或添食家蚕5龄幼虫进行免疫诱导,qRT-PCR结果显示家蚕ML家族成员在不同病原诱导之后均有不同程度的上调表达,推测ML家族成员可能参与到宿主对入侵病原物的免疫过程。
- 梅雄娥李致宏于滨仝超群潘国庆李春峰周泽扬
- 关键词：家蚕转录分析
- 家蚕BmNPC1蛋白在杆状病毒BmNPV入侵宿主细胞过程中的作用及机制研究
- C型尼曼-匹克病（Niemann-Pick disease type C,NPC）是一种致命的神经内脏脂质沉积病,其最显著的异常细胞表型为游离胆固醇沉积于溶酶体内,导致胆固醇从溶酶体向细胞内其他部位的运输障碍。尼曼匹克病...
- 李致宏
- 关键词：BMNPV细胞受体
- 文献传递
- 家蚕C-型凝集素11基因BmCTL11的克隆及表达分析
- 2016年
- 昆虫的C-型凝集素参与先天免疫系统中细胞间的相互作用,家蚕C-型凝集素11(C-type lectins,CTL11)基因BmCTL11是经家蚕微孢子虫(Nb)感染诱导后在蚕体内持续高量表达的基因。用生物信息学方法分析BmCTL11基因编码有307个氨基酸的多肽,预测分子质量34.51 kD,等电点4.69,含2个串联的典型C-型凝集素糖识别结构域,与烟草天蛾的IML-1蛋白进化距离最近。RT-PCR检测BmCTL11基因在家蚕幼虫时期的转录水平较高,并在多个组织有转录。将灭活的家蚕病原细菌、真菌、微孢子虫、病毒等注射家蚕5龄幼虫后的24 h内,qRT-PCR检测BmCTL11基因在幼虫脂肪体和中肠组织内的转录水平均发生上调,说明该基因能够被多种病原微生物诱导。以家蚕5龄第3天幼虫脂肪体c DNA为模板克隆了BmCTL11基因,连接到p ET-32a载体,诱导表达后将纯化的融合蛋白免疫昆明鼠制备出效价为1∶102 400的BmCTL11多克隆抗体。Western blot分析结果显示,BmCTL11蛋白可能以二聚体形式主要分布于家蚕脂肪体、血浆、中肠、表皮等组织中,推测BmCTL11在家蚕识别病原微生物并介导引发进一步的先天免疫反应过程中有重要的作用。
- 季小存李春峰孙滨郑容李致宏陈洁龙梦娴李田潘国庆周泽扬
- 关键词：家蚕基因克隆表达谱多克隆抗体
- 家蚕微孢子虫极管蛋白1(NbPTP1)的基因克隆及原核表达被引量：5
- 2014年
- 极管作为微孢子虫高度特异的结构,在微孢子虫侵染宿主细胞的过程中扮演重要角色。利用家蚕微孢子虫和兔脑炎微孢子虫基因组数据,通过共线性分析获得一个编码家蚕微孢子虫假定极管蛋白的基因NBO_7g0016。序列特征分析表明该基因编码富含脯氨酸的409个氨基酸,预测蛋白质分子质量39.6 kD,蛋白质序列的N端具有信号肽,有40个潜在的O-糖基化位点和17个磷酸化位点。以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板克隆NBO_7g0016基因,并构建插入该基因的重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)进行原核表达,融合蛋白经亲和层析纯化后免疫昆明小鼠制备多克隆抗体。免疫印迹实验证明该基因编码的蛋白质在成熟孢子中有表达,间接免疫荧光实验将蛋白质定位于家蚕微孢子虫的极管,确证该蛋白质为家蚕微孢子虫极管蛋白1(NbPTP1,GenBank登录号:EOB15198.1)。初步推测家蚕微孢子虫极管蛋白1具有糖基化修饰特征。
- 吴玉娇龙梦娴陈洁李治李致宏潘国庆李田周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫基因克隆原核表达免疫印迹分析
