- 黄芩汤对结肠炎相关性结肠癌肠道炎症和增殖的干预机制
- 2023年
- 目的:研究黄芩汤对结肠炎相关性结肠癌(CAC)小鼠模型的药效,并探究黄芩汤在CAC中调节免疫功能和炎症反应,抑制细胞异常增殖,延缓或抑制CAC形成的机制。方法:C57BL/6J小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组、黄芩汤高、低剂量组,每组12只,除正常组外其余小鼠均给予2次腹腔注射10 mg·kg^(-1)氧化偶氮甲烷(AOM),1.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用7 d,正常饮水2周,“DSS-饮水”重复2个循环。在给予DSS同时,正常组和模型组小鼠给予纯水等剂量灌胃;美沙拉嗪组小鼠给予150 mg·kg^(-1)·d(-1)美沙拉嗪混悬液灌胃;黄芩汤高、低剂量组小鼠分别给予黄芩汤18、9 g·kg^(-1)·d(-1)灌胃;各组均每日给药1次,直至3个循环结束。干预结束后,测量各组小鼠体质量、结肠长度、记录小鼠结肠肿瘤数目,并进行疾病活动指数(DAI)评分。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-4、IL-10及胃肠道肿瘤标志物糖类抗原-199(CA199)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠病变;免疫组化法观察结肠增殖细胞相关抗原(Ki67)表达变化;流式法检测小鼠血浆中T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD49b^(+))表达;荧光标记法检测小鼠血清中异硫氰酸荧光素-D(FITC-D)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织细胞周期相关蛋白细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶-2(CDK2)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、紧密连接相关蛋白咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1(Claudin-1)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量下降,DAI评分明显升高,结肠长度变短,IL-6、TNF-α、IL-1β等促炎因子均升高,其中IL-6、TNF-α升高明显(P<0.05)。抑炎因子IL-4明显降低(P<0.05),IL-10降低;肿瘤标志物CA199显著升高(P<0.01);HE染色结果显示模型组小鼠结肠出现瘤性病变,肠黏膜上皮缺损�
- 朱琳王敦方冯雪张彩娟刘海帆刘雅清刘滨刘滨杨伟鹏
- 关键词：炎症通透性增殖黄芩汤
- 百合地黄汤干预抑郁症大鼠的代谢组学研究
- 2023年
- 目的:探究百合地黄汤对抑郁症大鼠血清及粪便代谢组学的影响,筛选差异代谢物和代谢通路。方法:60只大鼠适应性饲养7 d后,随机分为正常组(10只)和应激组(50只),采用孤养和慢性不可预知性温和应激刺激制备大鼠抑郁症模型,造模成功的大鼠随机分为模型组,阳性对照组,百合地黄汤高、中、低剂量组,每组10只。给予百合地黄汤后,采用糖水偏好试验和旷场试验进行药效学评价;收集大鼠粪便和血清,应用LC-MS方法对大鼠血清和粪便进行非靶向代谢组学分析后,采用偏最小二乘方判别分析(OPLS-DA)和主成分分析(PCA),并联合t-test和变量投影重要性(VIP)筛选差异代谢物,应用KEGG数据库以及Metaboanalyst 5.0软件对差异代谢物进行通路富集。结果:与正常组大鼠比较,模型组大鼠体质量、糖水偏爱度和自主活动明显减少,给予百合地黄汤后,大鼠的抑郁样行为明显减少,抑郁大鼠的糖水偏爱度和在旷场中的自主活动明显增加。在代谢组学分析中,血清中共筛选出苯丙氨酰苯丙氨酸、5,6-二氢尿苷、L-谷氨酰胺等13个差异代谢物和丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢以及类固醇激素生物合成等10条代谢通路,粪便中共筛选出L-甲硫氨酸、5-羟赖氨酸、α-生育三烯酚和次胆酸等10个差异代谢物以及甘油磷脂代谢、半胱氨酸和甲硫氨酸代谢等5条代谢通路。结论:百合地黄汤可能通过调节抑郁症大鼠的氨基酸、类固醇激素和甘油磷脂等代谢改善大鼠的抑郁样行为。
- 冯雪刘雅清刘滨刘滨刘丽刘丽刘海帆朱琳杨伟鹏
- 关键词：百合地黄汤抑郁症代谢组学代谢通路
- 黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡的影响被引量：8
- 2022年
- 目的:研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)、Th1/Th2细胞平衡的影响。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.2 g·kg^(-1)),黄芩汤低、中、高剂量组(4.55、9.1、18.2 g·kg^(-1)),除正常组外均予以2.5%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水5 d诱导UC,连续灌胃给药7 d后处死小鼠,取肠系膜淋巴结(MLNs)和结肠组织,流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结Th17/Treg、Th1/Th2,流式细胞微球芯片捕获技术检测结肠组织白细胞介素(IL)-2、IL-17A、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-10等细胞因子含量,对结肠组织样本进行病理切片观察,并采用免疫组化法检测结肠组织中T细胞表达的T-box(T-bet)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)、IL-17A、叉头蛋白P3(FoxP3)的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠结肠组织中转化生长因子-β(TGF-β)的含量。结果:与正常组比较,模型组Th1、Th17细胞数量显著增高,而Th2、Treg细胞数量显著减少,Th1/Th2和Th17/Treg明显升高(P<0.05,P<0.01),小鼠结肠组织中T-bet、GATA-3、IL-17A、FoxP3表达明显升高(P<0.05,P<0.01),细胞因子IL-2、IL-17A、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量明显升高,IL-4、TGF-β、IL-10的含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,黄芩汤各剂量组均能逆转Th1/Th2和Th17/Treg细胞的比例失衡(P<0.01);黄芩汤低、中、高剂量组均可明显降低小鼠结肠T-bet、GATA-3的表达(P<0.05,P<0.01),黄芩汤高低剂量组可显著降低IL-17A的表达(P<0.01);黄芩汤高、中剂量组可显著降低细胞因子IL-2、IL-17A、IFN-γ、IL-6、TNF-α的含量,黄芩汤高剂量组还可明显增加TGF-β、IL-10的含量(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩汤可减轻UC小鼠结肠炎症,改善UC小鼠结肠组织损伤,这可能是通过调节Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡及相关细胞因子水平,调节促炎细胞因子的释放水�
- 刘滨刘雅清宋红新马旭冉王敦方冯雪杨伟鹏
- 关键词：黄芩汤溃疡性结肠炎
- 脂肪肝的中医临床和实验研究概况被引量：3
- 2007年
- 从临床研究和实验研究两方面,综述了近年来脂肪肝的中医药研究现状,认为中医药在治疗脂肪肝方面具有一定优势,同时提出目前亟待解决的问题。
- 刘滨佟颖李莲花谢晶日
- 关键词：脂肪肝中医药治疗
- 黄芩汤治疗溃疡性结肠炎及相关结肠癌的机制研究进展被引量：1
- 2023年
- 溃疡性结肠炎是一种病因尚不明确的慢性肠道疾病,主要症状为腹痛、腹泻、黏液脓血便等,并可伴有多种并发症,转化为结肠癌的风险较高。近年来溃疡性结肠炎和相关结肠癌的发病率有上升的趋势,严重影响人体健康和生活质量。手术和免疫抑制剂等是现代临床治疗溃疡性结肠炎和相关结肠癌的主要方法,但这些方法均有不同的不良反应,治疗效果不理想。多年来,中医药由于其不良反应小,疗效显著,在治疗溃疡性结肠炎和相关结肠癌方面备受关注。黄芩汤出自《伤寒论》,由黄芩、芍药、甘草和大枣组成,具有清热止利、和中止痛之功效,用于治疗溃疡性结肠炎疗效显著。黄芩汤成分复杂,以多靶点多途径发挥作用。经文献查阅并结合本课题组多年的研究成果,发现黄芩汤治疗溃疡性结肠炎和相关结肠癌的作用机制可能与保护肠黏膜屏障,抑制炎症反应,促进线粒体自噬,抑制氧化应激,调控肠道菌群、细胞周期、基因表达,抑制细胞增殖和促进细胞凋亡等多种机制相关。现将近年来的研究情况进行较为详尽的综述,以期能够为黄芩汤作用机制的深入研究及临床用药提供理论参考。
- 冯雪刘雅清刘滨刘滨王敦方杨伟鹏
- 关键词：溃疡性结肠炎结肠癌黄芩汤
- 黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群的影响及肠黏膜屏障的保护作用机制被引量：4
- 2023年
- 目的:研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠的药效,并探究黄芩汤在UC中是否能调节肠道菌群,发挥屏障保护作用。方法:雄性Balb/c小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、黄芩汤高(20 g·kg^(-1))、中(10 g·kg^(-1))、低(5 g·kg^(-1))剂量组、菌群干扰组、菌群干扰模型组、菌群干扰黄芩汤组(黄芩汤,20 g·kg^(-1))。灌胃抗生素(杆菌肽200 mg·kg^(-1)、万古霉素200 mg·kg^(-1))8 d构建菌群干扰模型,自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液7 d构建UC模型,黄芩汤给药治疗7 d。实验结束后处死小鼠,取血、结肠及粪便,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠病变,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中紧密连接蛋白1(Claudin1)、黏蛋白1(MUC1)、咬合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)mRNA和蛋白的表达,提取小鼠粪便DNA进行高通量测序分析。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清IL-4、IL-6、TNF-α含量明显升高(P<0.05,P<0.01),IL-10明显降低(P<0.05);与模型组比较,黄芩汤给药组IL-4、IL-6、TNF-α含量下降(P<0.05,P<0.01),IL-10含量显著上升(P<0.01),Claudin1、MUC1、Occludin、ZO-1 mRNA和蛋白表达明显上升(P<0.05,P<0.01)。菌群干扰后,小鼠肠道菌物种多样性及丰度降低,变形菌门(Proteobacteria)增多(P<0.01),厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)减少(P<0.01);DSS诱发UC后,拟杆菌门和柔壁菌门(Tenericutes)明显减少(P<0.05);黄芩汤高、中、低3个剂量组中拟杆菌门、柔壁菌门明显增多(P<0.05,P<0.01),厚壁菌门减少(P<0.05),乳酸菌属(Lactobacillus)、毛螺菌属(Lachnospiraceae NK4A136 group)、大肠埃希菌志贺属(Escherichia-Shigella)、螺杆菌(Helicobacter)的丰度与黄芩汤剂量呈正比。结论:黄芩汤可以抑制U
- 刘雅清徐航宇王敦方刘滨马旭冉冯雪杨伟鹏
- 关键词：黄芩汤溃疡性结肠炎肠道菌群肠黏膜屏障
- 黄芩汤对LPS诱导的RAW264.7炎症细胞的抗炎作用被引量：4
- 2023年
- 目的:以RAW264.7细胞为炎症模型,探究黄芩汤的抗炎作用机制。方法:制备黄芩汤,筛选对RAW264.7细胞的安全剂量;将RAW264.7细胞接种于24孔板中,先后加入黄芩汤和脂多糖(LPS),分别采用Griess法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定一氧化氮(NO)和白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))的含量;将RAW264.7细胞接种于6孔板中,设空白组、LPS组、LPS+黄芩汤组、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)抑制剂(PDTC)组、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂(SB203580)组、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂(PD98059)组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂(SP600125)组、Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK)抑制剂(AG490)组,先后加入相应的抑制剂和黄芩汤,并经LPS刺激后,提取RNA和蛋白,分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB p65、p38MAPK、ERK、JNK和JAK mRNA及蛋白的表达水平,探究黄芩汤通过调控NF-κB、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和JAK/信号转导及转录激活因子(STAT)信号通路发挥抗炎作用的机制。结果:与空白组比较,LPS刺激后,模型组细胞中NO、IL-6、TNF-α、PGE_(2)的浓度明显增加(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,加入黄芩汤后,NO、IL-6、TNF-α、PGE_(2)分泌量有减少趋势(P<0.05,P<0.01);与空白组比较,模型组细胞内p38 MAPK、ERK、JNK、JAK和NF-κB p65 mRNA及总蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,黄芩汤孵育后,炎症细胞内p38 MAPK、ERK、JNK、JAK和NF-κB p65总蛋白及mRNA的表达明显降低(P<0.05,P<0.01);同时各抑制剂组细胞内NF-κB p65总蛋白及mRNA表达均有下降趋势(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩汤能够通过NF-κB、MAPK和JAK/STAT信号通路抑制炎症反应。
- 刘雅清刘滨刘滨王敦方冯雪杨伟鹏
- 关键词：黄芩汤
- 黄芩汤通过Nrf2信号通路对Caco-2细胞抗氧化应激作用的机制被引量：2
- 2023年
- 目的:以Caco-2细胞为载体,结合基因干扰(RNAi)技术,通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E2相关因子2(Nrf2)通路发挥的抗氧化应激作用。方法:将处于对数生长期的Caco-2细胞,经siRNA转染,构建siRNA Caco-2细胞;将正常Caco-2细胞和siRNA Caco-2细胞与不同浓度的黄芩汤共同孵育后,提取RNA和蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、接头蛋白Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)及Nrf2 mRNA和蛋白的表达;同时,采用比色法和探针法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的表达水平。结果:与空白组比较,仅有黄芩汤400 mg·L^(-1)组与萝卜硫素(SFN)组可降低正常Caco-2细胞内ROS、MDA含量(P<0.01);而黄芩汤各剂量组与SFN组细胞内SOD与GSH-Px活力均有增加的趋势,且黄芩汤400 mg·L^(-1)组和SFN组与空白组比较差异有显著统计学意义(P<0.01);同时,各组细胞HO-1、GST、Keap1、NQO1和Nrf2蛋白及mRNA的表达量均有明显升高的趋势(P<0.05,P<0.01)。经转染后,与空白组比较,模型组细胞内MDA和ROS的含量升高,而GSH-Px和SOD的活力及HO-1、GST、Keap1和NQO1蛋白及mRNA的表达量均有不同程度地降低(P<0.05,P<0.01),与药物孵育后,与模型组比较,SFN组细胞内SOD活力和SFN组、黄芩汤各给药组GSH-Px活力显著升高(P<0.01),黄芩汤400 mg·L^(-1)组、200 mg·L^(-1)组和SFN组细胞内SOD和GSH-Px活力均有升高的趋势(P<0.01),黄芩汤400 mg·L^(-1)组和SFN组MDA有降低的趋势,且各给药组ROS均有降低(P<0.01);HO-1、GST、Keap1、NQO1和Nrf2的蛋白及mRNA表达均有不同程度增加(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩汤可以通过调控Nrf2通路发挥抗氧化应激的作用。
- 冯雪刘雅清刘滨刘滨王敦方杨伟鹏
- 关键词：黄芩汤氧化应激CACO-2细胞
- 黄芩汤含药血清对TNF-α诱导的Caco-2细胞炎症模型的影响被引量：2
- 2023年
- 目的:观察黄芩汤不同时间点的含药血清对TNF-α诱导的Caco-2细胞炎症模型的影响。方法:参照《伤寒论》组方及课题组的前期研究,煎煮、过滤、浓缩制成黄芩汤提取物,按照20 g/kg的剂量一次性给予大鼠黄芩汤,分别于给药后0、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24 h眼眶取血,分离血清,MTT法观察不同浓度的黄芩汤含药血清对Caco-2细胞增殖的影响;并用TNF-α诱导细胞炎症损伤模型,10%的含药血清给药18 h后,采用Griess法观察黄芩汤含药血清对其NO的影响,采用Elisa法测定IL-1β、PGE_(2)和TNF-α的变化。结果:与正常组相比,5%、10%、20%的黄芩汤含药血清作用Caco-2后,均有促进其增殖的作用,尤以10%黄芩汤含药血清的效果最佳;10 ng/mL的TNF-α致炎效果最佳;不同时间点的10%黄芩汤含药血清可降低炎症细胞内NO的含量,降低细胞内IL-1β、TNF-α和PGE_(2)的浓度。结论:黄芩汤不同时间点的含药血清对TNF-α诱导的Caco-2细胞炎症具有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制NO、IL-1β、TNF-α等炎性因子有关。
- 冯雪刘雅清刘滨刘滨王敦方杨伟鹏
- 关键词：黄芩汤含药血清TNF-ΑCACO-2细胞
- 桑叶多肽维持动物血糖健康水平的功能评价被引量：1
- 2022年
- 目的:通过正常动物的降糖实验及高血糖模型动物降糖实验评价桑叶多肽维持血糖健康水平的功能。方法:选取健康成年小鼠40只,随机分为4组,正常对照组、桑叶多肽1组、桑叶多肽2组及桑叶多肽3组,每组10只。除正常对照组外其余各组给予桑叶多肽高剂量浓度受试样品,连续30 d,检测空腹血糖值;健康雄性SD大鼠,根据0 h和0.5 h的血糖值分为7组,分别为模型对照组,正常对照组,桑叶多肽1高、中、低剂量组,桑叶多肽2组和桑叶多肽3组,每组15只。采用高热能饲料喂养辅以四氧嘧啶腹腔注射,诱发实验性糖尿病大鼠模型,连续给药33 d,检测空腹血糖、糖耐量及胆固醇、甘油三酯水平。结果:正常小鼠降血糖实验结果显示,给药30 d后,各给药组小鼠体质量与正常对照组相比无明显变化,桑叶多肽1、桑叶多肽2、桑叶多肽3组空腹血糖值较正常对照组有所下降,其中,桑叶多肽1组血糖值降低有统计学意义(P<0.05);高血糖模型大鼠降糖实验结果显示,正常对照组、模型对照组和各给药组0 h血糖值均在3.2~6.3 mmol/L,模型对照组较正常对照组血糖升高,差异有统计学意义(P<0.05),各给药组与模型对照组相比,无明显变化;给予葡萄糖0.5 h后,各组血糖均>10.0 mmol/L,桑叶多肽1低、中、高剂量组的血糖值均低于模型对照组,但差异不具有统计学意义;桑叶多肽2和桑叶多肽3组血糖值较模型对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。给予葡萄糖2 h后,各实验组2 h血糖值明显低于模型对照组,均具有统计学意义(P<0.05)。给药33 d后,各给药组与模型对照组相比,CHO、TG指标均无明显变化。结论:桑叶多肽1对正常动物血糖有一定降低作用,对于高血糖模型动物降血糖作用也较明显,桑叶多肽2、桑叶多肽3都具有维持血糖健康水平的作用。
- 冯雪王希搏王敦方马旭冉刘雅清刘滨刘滨
- 关键词：桑叶降血糖
