钟杰
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：贵州大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国烟草总公司科技项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 烟草CYP71基因的克隆与原核优化表达被引量：1
- 2018年
- 本文从烟草中克隆出CYP71基因,进行生物信息学分析,并在原核细胞中表达出目的蛋白。应用RTPCR,从野生型烟草(Nicotiana tabacum)叶片中克隆出一种CYP450 c DNA序列(CYP71)。序列分析表明,烟草CYP71基因ORF长为1545 bp,编码514个氨基酸,基因登录号为KC480444.1。将去除跨膜信号肽及密码子优化后的基因合成后,构建至p ET-30a表达载体,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳、Western-blot检测,获得与预期一致的49 KDa蛋白质,为进一步研究CYP71基因的抗虫功能奠定了基础。
- 佟硕秋高洁钟杰贡献吴拥军
- 关键词：烟草基因克隆生物信息学分析原核表达
- 烟草HD-ZIP转录因子HD20的克隆及纤维分化功能的研究被引量：2
- 2018年
- 旨在揭示烟草HD20在植物纤维分化中的作用。基于前期烟草基因组数据库设计特异性引物,通过RT-PCR克隆获得基因cDNA序列,将其命名为HD20,NCBI登录号为KC339003。该基因全长762 bp,编码253个氨基酸,亚细胞定位于细胞核,其编码的HD-ZIP蛋白由2个不同的结构域组成,包括N末端含有60个氨基酸的HD结构域和其后28个氨基酸组成的ZIP基序。构建植物表达载体,通过农杆菌蘸花法遗传转化拟南芥,经筛选获得阳性转基因植株,其石蜡切片显示,茎部木质部较对照发达。HD20对烟草及拟南芥的纤维分化具有调控作用。
- 高洁佟硕秋钟杰贡献吴拥军
- 关键词：烟草石蜡切片
- 菌种保藏方法研究被引量：4
- 2018年
- 本文对常用的菌种保藏方法进行简要介绍并对其优缺点进行研究分析。同时对菌种保藏过程中,其退化原因和复壮措施进行介绍。
- 钟杰左泽彦
- 关键词：菌种保藏菌种退化复壮
- 烟草CAF1基因的克隆与原核优化表达被引量：2
- 2019年
- CAF1基因在植物的发育和抗逆性方面起到特定的作用。本研究旨在通过对烟草中CAF1基因进行克隆与原核表达分析,为研究其代谢机制提供数据支持。我们从野生烟草中提取总RNA,通过RT-PCR克隆获得CAF1的cDNA序列,NCBI登录号为KJ003855,生物信息学分析表明,CAF1 ORF长为855 bp,编码285个氨基酸,亚细胞定位于细胞核,其编码的CAF1蛋白仅有1个高度保守结构域:CAF1 superfamily(16~284);构建p ET30a-CAF1原核表达载体,转化到E.coli BL21(DE3)中,获得浓度为0.213 mg/mL、纯度90%,且与预期一致的28 kD蛋白质。目的蛋白的成功表达为进一步研究CAF1在抗病、抗虫功能提供理论参考和数据支持。
- 钟杰佟硕秋贡献林宗梅孙元烽张问平郑娟吴拥军
- 关键词：烟草原核表达生物信息学分析
- 枯草芽孢杆菌精氨酸脱羧酶基因speA的表达与蛋白纯化被引量：1
- 2017年
- 根据枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BJ3-2的精氨酸脱羧酶(ADC)的编码基因spe A序列设计特异性酶切引物,克隆基因speA序列。测序结果显示,基因speA全长为1473 bp,编码490个氨基酸,分子质量为58 ku。基因spe A克隆至原核表达载体,获得重组菌pET28a-spe A/BL21,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,1.0 mmol/L的异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)28℃诱导4 h,上清液和菌体均能表达出ADC蛋白,上清液经纯化、透析、冷冻干燥可获得纯度97%的ADC酶,酶联免疫吸附检测(ELISA)ADC酶活为16780 U/mg。为speA基因的表达、纯化及酶学性质研究奠定了理论基础。
- 曹宁王亚娟钟杰佟硕秋吴拥军
- 关键词：枯草芽孢杆菌纯化
- 烟草CSN4基因的原核表达及纯化被引量：1
- 2017年
- 以野生型烟草(Nicotiana tabacum)为试验材料,采用RT-PCR克隆获得CSN复合体亚基CSN4c DNA序列,基因登录号为KC866360。序列分析表明,CSN4基因ORF长为1194 bp,编码398个氨基酸,蛋白分子质量为43.78 k Da。将CSN4构建至原核表达载体,获得重组子pET28a-CSN4/BL21(DE3),通过Ni-IDA亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western Blotting检测,结果显示:0.25 mM IPTG,15℃诱导16 h获得浓度为0.476 mg/m L、纯度高达95%的CSN蛋白,为后续CSN4基因功能研究奠定了基础。
- 龚露钟杰高洁佟硕秋吴拥军
- 关键词：基因克隆原核表达
