段琳琳
- 作品数：8 被引量：10H指数：3
- 供职机构：上海理工大学更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程理学更多>>
- 一种复合稳定剂及添加该复合稳定剂的NAD激酶的酶活测定方法
- 本发明提供了一种复合稳定剂及添加该复合稳定剂的NAD激酶的酶活测定方法，具有这样的特征，该方法包括以下步骤：步骤一，制备粗酶液；步骤二，将粗酶液分装于多个离心管中，向一部分离心管加入与保护剂，向另一部分离心管加入双蒸水；...
- 李红梅袁飞飞段琳琳亢涵
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- 一种芋头膨化制品的制备方法
- 本发明提供的芋头膨化制品的制备方法，由于经过了一次挤压膨化后再经二次油炸膨化，相比单纯地挤压膨化，芋头膨化制品的口感和外观均得到了改善，相比单纯的油炸膨化，芋头膨化制品的含油率减小了。
- 亢涵李红梅段琳琳袁飞飞
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- 保护剂对重组大肠杆菌NMN转移酶稳定性的影响被引量：4
- 2016年
- 通过向NMN转移酶（Nmnat）中添加保护剂以提高其热稳定性及储存稳定性,扩大酶的使用范围。研究了固体醇类（山梨醇、甘露醇）、糖类（海藻酸钠、蔗糖、甘露糖）和有机溶剂（DMSO、丙二醇-单甲醚、乙醇、甘油）对Nmnat的稳定性的作用,通过正交实验得到一种复合保护剂,并研究复合保护剂对Nmnat最适反应温度、pH稳定性、储存稳定性的影响。结果表明,山梨醇、海藻酸钠和DMSO能够显著提高Nmnat的热稳定性。复合保护剂配方为山梨醇1.5 g/L,海藻酸钠1.0 g/L,DMSO 0.5%。复合保护剂的添加使Nmnat的最适反应温度从37℃提高到50℃;50℃保温2 h酶活提高了24.5%;pH使用范围由7.0~8.0扩大到6.0~8.0;4℃储存28 d后,酶活保留率提高了15.65%。
- 段琳琳李红梅
- 关键词：保护剂热稳定性正交实验
- 来源于大肠杆菌的NMN转移酶的克隆表达与酶学性质研究被引量：6
- 2016年
- 在生物体内,NMN(烟酰胺单核苷酸)转移酶能够催化NMN生成NAD。本研究通过构建重组表达质粒p ET30α(+)-Nmnat,成功实现来源于大肠杆菌的NMN转移酶基因(Nmnat)的原核表达。从大肠杆菌基因组中克隆得到的NMN转移酶基因长度为1 245 bp,所编码的重组酶分子量45 k Da。对重组酶的酶学性质进行分析,结果显示该酶最适反应温度和p H分别为37℃和7.5。4℃下,该酶的热失活半衰期可长达990.2 min。Mn2+、Fe2+对该酶的酶活的激活作用显著,而EDTA对酶活能造成明显的抑制作用。酶动力学分析结果显示,该酶对底物NMN催化的Km和Vmax分别为16.89 mmol/L和2.46μmol/(L·min)。该NMN转移酶基因在大肠杆菌宿主中的成功表达,为NAD生物合成应用研究奠定了基础。
- 段琳琳李红梅
- 关键词：大肠杆菌克隆表达酶学性质
- 响应面-满意度函数优化重组大肠杆菌产NMN转移酶发酵条件被引量：3
- 2016年
- 重组大肠杆菌Escherichaia coli能高效表达NMN转移酶,以此为出发菌株,以菌体生长量OD600和NMN转移酶的活力为响应值,对重组大肠杆菌产NMN转移酶的发酵条件进行优化。首先以Plackett-Burman实验设计优化筛选出3个主要影响因子:胰蛋白胨、甘油、Mg SO4;随后以BoxBehnken中心组合设计建立上述3个因子对OD600和NMN转移酶活力水平的数学模型;最后通过满意度函数获得最佳发酵条件为:酵母粉30 g/L,胰蛋白胨10.5 g/L,甘油3.49 m L/L,Mg SO40.45g/L,K2HPO440.5 g/L,KH2PO46.0 g/L,NH4Cl 1.5 g/L,Na Cl 0.6 g/L,接种量1.5%,诱导时间12h。在该优化条件下,菌体生长和产酶水平均获得了显著的提升。重组NMN转移酶的活力水平从8.85 U/mg提高到15.48 U/mg,菌体生长量OD600从4.85提高到6.01,提高幅度分别为74.92%和23.92%。
- 段琳琳李红梅何海
- 关键词：发酵优化响应面法
- 一种发酵培养基及用该发酵培养基发酵NMN转移酶的方法
- 本发明提供了一种发酵培养基及用该发酵培养基发酵NMN转移酶的方法，包括以下步骤：步骤一，制备含有大肠杆菌的固体培养基；步骤二，制备活化液；步骤三，将大肠杆菌接种到活化液中，加入硫酸卡那霉素，得到含有活化的大肠杆菌菌体的液...
- 李红梅段琳琳袁飞飞亢涵
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- 复合稳定剂及添加该复合稳定剂的NMN转移酶的酶活测定方法
- 本发明提供了一种复合稳定剂及添加该复合稳定剂的NMN转移酶的酶活测定方法，具有这样的特征，该方法包括以下步骤：步骤一，制备粗酶液；步骤二，将制备得到的粗酶液分装于多个离心管中，向其中一部分离心管中加入保护剂，向另一部分离...
- 段琳琳李红梅袁飞飞亢涵
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- 蜡样芽孢杆菌亮氨酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达及重组酶性质被引量：1
- 2015年
- 本研究采用PCR技术从蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus基因组DNA中克隆出亮氨酸脱氢酶基因，构建重组表达质粒pET280t（＋）-ldh，实现在大肠杆菌中的高效表达，并分析重组亮氨酸脱氢酶的酶学性质。结果表明，从Bacillus cereus成功克隆的亮氨酸脱氢酶编码基因约为1000bp，表达的重组亮氨酸脱氢酶相对分子质量约为40kDa。酶学研究结果表明：该酶的最适反应温度为37℃，其热稳定性好，30℃的半衰期长迭330h；最适反应pH为9．5；在pH7．0-8．0的缓冲液中保存24h后仍保持原有酶活力的80％以上；金属离子Fe2＋对该酶具有明显的促进作用，而EDTA强融抑制亮氨酸脱氢酶的活性。动力学分析结果表明该酶对底物NADH催化的km和Vmax。分别为0．635mmol／L和1．54μmol／（L·min）。亮氨酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的成功表达为手性氨基酸的生物合成提供了可能。
- 陈宝珍李红梅段琳琳
- 关键词：蜡样芽孢杆菌克隆表达酶学性质
