李春燕
- 作品数：11 被引量：13H指数：2
- 供职机构：福建农林大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家级星火计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪圆环病毒3型PCR诊断方法的建立被引量：6
- 2017年
- 根据NCBI中PCV3的基因组序列,设计了1对特异性引物,并对PCR的反应体系和反应条件进行优化,同时进行特异性和敏感性试验,最后应用所建立的PCR方法检测了临床送检的22份病料。结果显示,建立的PCR方法的最佳反应条件为总体积25 L,退火温度56℃,模板DNA量3 L(l ng/m L),进行35个循环。该PCR能特异地扩增出目的片段,长度约为381 bp。测序结果表明,PCR扩增产物正确。该PCR反应特异性强,只能扩增PCV3阳性样品,且能扩增的最低模板量为1×10-4ng/m L。用该PCR对送检的22份病料进行PCV3检测,结果阳性率为13.6%。可见,本研究建立的PCR方法特异、敏感,可用于PCV3的快速检测。
- 郑庆礼李春燕林在纲许丽惠王全溪
- 关键词：聚合酶链式反应
- 鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备被引量：1
- 2018年
- 为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni^(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。
- 袁晓琴陈仕怡刘梦茜李春燕许丽惠周五朵吴异健王全溪
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 鸡PERK的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2017年
- 根据鸡的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)基因序列进行抗原肽分析,选择含大片段抗原表位区约1 500 bp的一段基因(15~1 515 bp)设计一对特异性引物后进行RT-PCR扩增,并构建pET-32a(+)-PERK重组质粒,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中.优化诱导表达条件,纯化重组蛋白后免疫兔并制备多克隆抗体.PCR鉴定、酶切鉴定和测序结果表明,pET-32a(+)-PERK重组质粒构建成功.SDS-PAGE电泳鉴定结果表明,重组蛋白在1.0 mmol·L-1IPTG、25℃下诱导9 h时的表达量最大.蛋白纯化结果表明,100 mmol·L-1咪唑洗脱液可较好地洗脱重组蛋白,获得较多的纯化蛋白.免疫结束后,抗体效价检测结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶32 000,可以与重组蛋白特异结合.
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- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 采用PCR-RFLP法鉴别IBDV强毒BC6/85株和弱毒B87株
- 2019年
- 选取传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒力代表株BC6/85和弱毒力代表株B87为研究对象,根据VP2基因保守区设计一对通用引物和两个限制性内切酶位点,分别扩增两个毒株的VP2基因,然后进行BamHⅠ和PstⅠ酶切,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)分析酶切产物,并进行特异性、敏感性和重复性检测.结果表明:所设计的引物均可扩增两个毒株的VP2基因,大小约856 bp;经BamHⅠ和PstⅠ酶切后,BC6/85株的PCR产物被BamHⅠ和PstⅠ切出166、242和449 bp大小的3个片段,而B87株仅被PstⅠ切出242和615 bp大小的2个片段,且重复性好,特异性强.可见,采用PCR-RFLP分析IBDV VP2基因的方法操作简单,是一种能够快速鉴别IBDV强、弱毒株的可靠方法.
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- 猪流行性腹泻病毒M蛋白的原核表达
- 近年来,猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)给哺乳仔猪造成了严重的损失.M蛋白是PEDV重要的跨膜结构蛋白,是基因工程疫苗和诊断试剂的理想抗原.本实验设计M基因的特...
- 刘梦茜李春燕陈仕怡袁晓琴星东王全溪
- 关键词：猪流行性腹泻病毒M蛋白重组蛋白原核表达
- 猪圆环病毒3型PCR诊断方法的建立
- 2016年美国首次报道了猪圆环病毒(Porcine Circovius,PCV)出现了新的血清型即猪圆环病毒3型(PCV3).本研究建立了PCV3的PCR诊断方法,对进一步研究PCV3在中国的流行情况和其致病机理具有重要...
- 郑庆礼李春燕林在纲许丽惠王全溪
- 关键词：PCR方法
- 猪流行性腹泻病毒S蛋白和M蛋白串联表达的研究被引量：1
- 2018年
- 猪流行性腹泻病毒(porcine epizootic diarrhea virus,PEDV)的M和S蛋白与中和抗体的形成有关,同时获得这两种蛋白质对预防和控制PED有重要的意义.本研究在实验室保存的M蛋白重组质粒的基础上构建了Pet-32a-M-S串联重组质粒.通过PCR鉴定、酶切鉴定和测序证实串联重组质粒构建成功.将Pet-32a-M-S质粒转染到BL21感受态细胞中,筛选诱导的最佳条件,最后进行Western blot鉴定.结果表明,串联重组蛋白最佳诱导条件为25℃、8 h、0.6 mmol·L-^(1)IPTG; Western blot鉴定结果表明,重组质粒能够同时诱导PEDV的S和M蛋白.因此,本试验成功获得PEDV S和M蛋白在体外的串联诱导表达,为PEDV亚单位疫苗的研究提供了基础.
- 陈媛郑庆礼李春燕袁晓琴王全溪
- 关键词：S基因M基因
- 新-法二联灭活疫苗免疫不同日龄商品蛋鸡的效果被引量：1
- 2017年
- 为探讨新城疫-传染性法氏囊病二联灭活疫苗(ND-IBD二联灭活苗)对不同日龄商品蛋鸡的免疫效果,选择360只1日龄商品蛋鸡,分别于1、7日龄接种ND-IBD二联灭活苗,对照组接种灭菌生理盐水,分别于21-56日龄,每隔7d采血,分离血清,检测ND和IBD抗体水平,剖检取脾脏与法氏囊观察病变,荧光定量PCR检测免疫因子CD4^+、CD8^+、IL-6、IFN-βmRNA表达量,并进行攻毒保护试验。结果表明,1、7日龄商品蛋鸡接种ND-IBD二联灭活苗,其ND和IBD的抗体水平均有效提高,且在免疫后可以有效保护IBDV强毒的感染,但7日龄免疫效果更好。免疫因子的mRNA表达量检测结果表明,7日龄接种疫苗的免疫组免疫因子CD4^+、CD8^+、IL-6、IFN-β的mRNA表达量明显高于对照组1日龄。综上,ND-IBD二联灭活疫苗7日龄免疫商品蛋鸡免疫效果更好。
- 星东刘梦茜袁晓琴李春燕陈仕怡江兴华赵华娥包松英王全溪
- 关键词：新城疫传染性法氏囊灭活苗
- 猪流行性腹泻病毒M蛋白的原核表达被引量：1
- 2017年
- 本试验设计了M基因的特异性引物,扩增了M基因,成功构建了重组质粒,并转化至Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞中,优化了异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达条件.结果表明,重组表达的融合蛋白Pet-32a-M大小约为43 ku,与预期大小相符.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表明,M蛋白为包涵体蛋白,且在IPTG浓度为0.8 mmol·L-1,温度为37℃,诱导时间为8 h的条件下,蛋白表达效果最佳.蛋白免疫印迹检测结果进一步显示,重组蛋白Pet-32a-M在体外可以被成功表达.
- 刘梦茜李春燕陈仕怡袁晓琴星东王全溪
- 关键词：猪流行性腹泻病毒M蛋白原核表达
- 基于ORF3蛋白的PCV2间接ELISA诊断方法的建立
- ORF3蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2,PCV2)的一个重要的非结构蛋白.根据GenBank数据库中PCV2的ORF3编码基因序列设计引物,以PCV2基因组为模版进行PCR扩增,并...
- 李春燕刘梦茜陈仕怡袁晓琴星东庄育彬王全溪
- 关键词：猪圆环病毒2型感染抗体检测间接ELISA法
