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龙艳
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1
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供职机构:
重庆医科大学附属第一医院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
邓常青
重钢总医院
朱炳林
重庆医科大学附属第一医院
罗伟
重庆医科大学附属第一医院
陈国俊
重庆医科大学附属第一医院
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重钢总医院
作者
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陈国俊
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龙艳
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罗伟
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朱炳林
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邓常青
传媒
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重庆医学
年份
1篇
2017
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稳定表达人BACE1启动子及荧光素酶报告基因HEK293细胞株的建立
2017年
目的对人β位点裂解酶-1(BACE1)基因核心启动子进行克隆,构建携带BACE1基因启动子的荧光素酶报告载体,筛选稳定表达细胞株并分析其转录活性。方法提取人胚肾HEK293细胞基因组DNA,以其为模板,PCR扩增BACE1核心启动子(-691^+67)并克隆至荧光素酶报告载体pGL4.21中,构建BACE1基因启动子荧光素酶报告载体pGL4.21-BACE1,将其转染HEK293细胞(无启动子的pGL4.21载体作阴性对照),利用嘌呤霉素筛选稳定表达株后检测其转录活性。结果成功扩增到758bp的BACE1核心启动子,pGL4.21-BACE1载体经双酶切鉴定正确;HEK293细胞被该载体转染后经嘌呤霉素筛选得到6株稳定表达BACE1启动子的细胞株,其转录活性分别是对照组(HEK293/pGL4.21)的(134.7±22.3)、(634.0±13.9)、(437.6±6.1)、(805.5±5.5)、(492.8±59.1)、(1 021.1±46.6)倍(P=0.001)。结论成功构建了人BACE1基因启动子荧光素酶报告载体。
邓常青
朱炳林
龙艳
罗伟
陈国俊
关键词:
核心启动子
高通量药物筛选
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