郑燕
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
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- 优化密码沙眼衣原体主要外膜蛋白基因的设计合成与表达
- 2005年
- 目的:设计合成优化密码沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因,克隆构建优化密码MOMP(HuMOMP)基因的真核表达质粒及EGFP-HuMOMP融合基因表达质粒。方法:利用软件分析比较鼠肺炎沙眼衣原体(MoPn)与人类等哺乳动物基因组密码子使用的差异,根据所得数据对MOMP基因进行优化设计与合成。双酶切pUC-HuMOMP质粒,游离HuMOMP片段,定向克隆入pcDNA3的相应位点,构建重组真核表达质粒pcDNA3-HuMOMP;双酶切游离pcDNA3-HuMOMP中的HuMOMP片段,定向克隆入pEGFP-C1的相应位点,构建重组真核表达质粒pEGFP-HuMOMP;pEGFP-HuMOMP质粒体外脂质体转染COS-1细胞,24h后观察荧光蛋白的表达。结果:合成的HuMOMP基因全长1125bp,经DNA测序无误。酶切鉴定pcDNA3-HuMOMP及pEGFP-HuMOMP质粒获得预期分子量DNA片段。EGFP-HuMOMP融合基因在COS-1细胞中获得明显表达,表达产物定位于胞浆。结论:设计合成的优化密码HuMOMP基因能够在哺乳动物细胞中成功表达。
- 郑燕赵蔚明王红周亚滨栾怡齐眉程轶喆贾继辉于修平
- 关键词：基因表达遗传密码
- 腺病毒介导MOMP基因转染对树突状细胞免疫功能的影响
- 2008年
- 目的探讨腺病毒（Ad）介导E型沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）基因转染对树突状细胞（DC）的表型及体内免疫功能的影响。方法用小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）及白细胞介素4（IL-4）从小鼠骨髓干细胞中诱导培养DC，并用大肠杆菌脂多糖（LPS）促进DC的成熟，流式细胞仪检测DC表型。用不同感染滴度（MOI）的含增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的重组Ad转染DC，荧光显微镜下观察EGFP的表达细胞百分率，选择最佳MOI；用最佳MOI的含MOMP基因的重组腺病毒（Ad-MOMP）转染DC，流式细胞术检测转染前后DC表型变化，并用活细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测转染前后DC刺激同种淋巴细胞增殖的能力；ELISA检测转染前后DC分泌细胞因子及DC、T细胞共同培养上清中细胞因子的水平。Ad-MOMP转染DC经尾静脉免疫小鼠，ELISA检测其脾脏淋巴细胞分泌的细胞因子。结果诱导的DC形态典型，表面高表达CD11c、MHCⅡ类分子，中度表达CD80分子。MOI=1000为重组Ad转染DC最佳滴度，此时90％以上的DC表达荧光，Ad-MOMP转染DC后能检测到MOMP的表达。Ad-MOMP转染对DC表面的特征性表型CD11c无影响，而CD80及MHCⅡ表达上调；转染后的DC分泌大量IL-12，具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力，并刺激T细胞分泌大量IFN-γ。Ad-MOMP转染DC后尾静脉免疫小鼠，其脾细胞产生高水平的IFN-γ。结论Ad载体能介导外源MOMP基因在DC中的表达，Ad-MOMP转染DC后MOMP基因的表达能增强DC抗原提呈功能，促进DC活化，转染后的DC与T细胞共孵育能诱导T细胞向TH1细胞分化，体内实验表明Ad-MOMP转染DC能诱导衣原体特异性TH1反应。这为Ad-MOMP转染的DC疫苗用于免疫治疗提供了理论依据和技术基础。
- 吕慧王红李湘新齐眉刘娟郑燕李靖赵蕾杨熙于修平赵蔚明
- 关键词：沙眼衣原体腺病毒载体树突状细胞
- 沙眼衣原体生殖道感染的小鼠模型及其应用
- 2004年
- 沙眼衣原体生殖道感染是严重危害人类生殖健康的一种常见的性传播疾病,研制安全、有效的疫苗是控制其感染的有效措施.在疫苗的研制中选择合适的动物模型非常重要.近几十年来学者们建立了多种沙眼衣原体生殖道感染的小鼠模型,根据接种途径可分为阴道内接种和子宫或卵巢囊内接种两大类.研究发现不同模型各有利弊,本文对两大类沙眼衣原体生殖道感染小鼠模型及其应用进行了综述.
- 郑燕赵蔚明
- 关键词：小鼠模型疫苗
- HPV6b野生型E7基因与优化密码E7基因mRNA表达的分析被引量：2
- 2003年
- 目的:构建人乳头瘤病毒6b型(HPV6b)E7基因重组真核表达质粒,比较优化密码E7基因(hu-E7)与野生型E7基因(wtE7)在mRNA水平的表达差异,初步探讨优化密码增强E7基因表达的机制。方法:EcoRI和KpnI双酶切pUC-wtE7质粒,游离wtE7片段,定向克隆入pcDNA3的EcoRI和KpnI位点,构建含wtE7的重组真核表达质粒pcDNA3-wtE7;与含hu-E7的pcDNA3-huE7质粒同时体外脂质体转染人羊膜细胞(wish细胞),提取细胞总RNA,采用RT-PCR方法,以β-actin做内参照半定量分析比较hu-E7与wtE7在wish细胞内的mRNA表达水平。结果:用EcoRI和KpnI双酶切重组表达质粒pcDNA3-wtE7可释放5.4kb和314bp两片段,说明质粒构建正确。RT-PCR结果显示,HPV6b-huE7与HPV6b-wtE7转染组在预计分子量190bp处均有明显特异性条带,对照组则无。凝胶成像分析仪半定量结果分析,二者无明显差异,无统计学意义P>0.05。结论:成功构建pcDNA3-wtE7真核表达质粒,并在wish细胞中获得特异性E7mRNA表达。HPV6b-hu-E7与HPV6b-wtE7基因在wish细胞内特异性E7mRNA的表达水平没有明显差异。
- 郑燕赵蔚明周亚滨王红栾怡于修平
- 关键词：乳头状瘤病毒真核细胞MRNA表达
- 密码修饰可增强沙眼衣原体MOMP DNA质粒免疫小鼠的免疫应答
- 2006年
- 目的探讨密码修饰对沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因表达和DNA质粒免疫的影响。方法根据人类密码子使用偏好对鼠肺炎沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis mouse pneumoni-tis)MOMP基因进行优化修饰,设计合成人源化MOMP基因(HuMOMP)。构建以pcDNA3为载体的含HuMOMP及含野生型MOMP基因(WtMOMP)的真核表达质粒。瞬时转染COS-1细胞,Western blot方法比较HuMOMP基因及WtMOMP基因在哺乳动物细胞中的蛋白表达水平。DNA质粒肌内免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清特异性抗体、DTH和淋巴细胞增殖反应,比较优化密码MOMP基因和野生型MOMP基因DNA质粒免疫的免疫效果。结果人工合成HuMOMP基因,成功构建重组真核表达质粒pcDNA3-HuMOMP及pcDNA3-WtMOMP。转染细胞Western blot结果显示,HuMOMP基因的蛋白表达水平明显高于WtMOMP基因。ELISA结果表明,HuMOMP DNA质粒免疫组小鼠血清特异性IgG抗体有所升高;细胞免疫检测结果显示,HuMOMP DNA质粒免疫组小鼠足垫肿胀程度增强、淋巴细胞增殖实验刺激指数(SI)增高,两者与WtMOMP DNA质粒免疫组相比P<0.05,差异均有统计学意义。结论人源化密码修饰能够增强沙眼衣原体MOMP基因在哺乳动物细胞中的蛋白表达及DNA质粒免疫小鼠的免疫反应,这对于新型衣原体DNA疫苗的研究具有重要意义。
- 郑燕赵蔚明王红周亚滨栾怡齐眉程轶喆唐伟于晗杨熙
- 关键词：沙眼衣原体MOMP密码子
- 密码修饰可增强沙眼衣原体MOMP DNA疫苗的免疫反应
- 目的沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)主要外膜蛋白(major outer membrane protein, MOMP)是沙眼衣原体疫苗研究的首要靶抗原。本研究在分析沙眼衣原体全基因组编码序...
- 郑燕赵蔚明王红栾怡周亚滨齐眉贾继挥程轶喆于修平
- 关键词：沙眼衣原体MOMP密码子DNA免疫
- 文献传递
- E型沙眼衣原体MOMP基因重组质粒的构建与表达被引量：2
- 2005年
- 目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组真核表达质粒pVAX1-MOMP,为探索安全的E型CtDNA疫苗奠定基础。方法:根据Genebank中E型CtMOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到约1.1kb的MOMP片段,克隆至pcDNAII载体,测序后亚克隆至表达载体pVAX1,构建卡那霉素抗性真核重组表达质粒pVAX1-MOMP,并以重组质粒转染COS-1细胞进行表达,用Westernblotting方法鉴定表达产物。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出特异的MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实pVAX1-MOMP重组质粒构建正确,能在COS-1细胞内表达,表达产物能与抗MOMP单克隆抗体特异性结合。结论:成功构建E型沙眼衣原体MOMP真核表达质粒pVAX1-MOMP,并在真核细胞内获得表达。
- 吕慧赵蔚明郑燕王红周亚滨齐眉栾怡程轶喆于晗杨熙于修平
- 关键词：衣原体沙眼基因表达基因MOMP
- 沙眼衣原体感染对树突状细胞功能的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨鼠型沙眼衣原体(Chlamydia muridarum,C.muridarum)在树突状细胞(Dendritic Cell,DC)内的存活情况以及对DC功能的影响,为衣原体致病机制的研究提供实验依据。方法诱导培养BALB/c小鼠骨髓来源的DC。用C.muridarum感染DC,分别在247、2 h固定细胞进行衣原体包涵体染色;采用ELISA方法检测感染DC上清中的细胞因子;感染DC与T细胞共孵育48 h,CCK-8检测T细胞增殖。结果C.muri-darum能够感染骨髓来源DC,衣原体在DC中生长缓慢,形成非典型的包涵体;感染后的DC分泌较高水平的IL-12和低水平的IL-10;并且能够刺激T细胞增殖,说明衣原体感染的DC仍然具有抗原递呈能力。结论成功建立C.muridarum感染DC的体外细胞模型,且沙眼衣原体感染对DC抗原递呈功能没有造成明显影响。
- 赵红梅赵蔚明于修平赵蕾王红郑燕吕慧李靖刘娟于晗
- 关键词：衣原体沙眼树突细胞近交BALBC
- E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究被引量：5
- 2006年
- 目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组腺病毒,为沙眼衣原体腺病毒疫苗的研究奠定基础。方法:根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到MOMP基因片段,克隆至pcDNAII载体,测序后连接入腺病毒穿梭载体pDC316。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至HEK293细胞,在Cre-loxP重组酶作用下进行重组,包装成重组腺病毒颗粒,用PCR和RT-PCR方法进行鉴定。并用动物免疫试验检测重组腺病毒的免疫原性。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出约1.1 kb的特异MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实穿梭载体pDC316-MOMP构建正确。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至293细胞,出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒,PCR法证实重组腺病毒含有MOMP基因,RT-PCR证实重组腺病毒在293细胞能表达MOMP基因。重组腺病毒免疫小鼠可诱导特异性抗体产生,证明重组腺病毒具有良好免疫原性。结论:成功构建了E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒,该重组腺病毒可诱导小鼠产生特异性抗体。
- 吕慧赵蔚明于修平郑燕王红周亚滨齐眉于晗杨熙
- 关键词：衣原体沙眼重组腺病毒MAJOR近交BALB
- 人唾液CCL28与sIgA抗体分泌的相关性研究被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨健康人唾液中粘膜相关上皮趋化因子CCL28与sIgA抗体分泌的关系。方法:收集非刺激性全唾液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测唾液中CCL28的含量。速率散射比浊方法定量检测唾液中sIgA的含量。结果:42例健康人唾液中所含CCL28的浓度平均值为(70.70±40.91)ng/ml,sIgA的浓度平均值为(113.86±54.90)mg/L,两者之间存在线性正相关关系(r=0.540)。结论:粘膜上皮趋化因子CCL28对唾液中sIgA的分泌起促进作用。
- 李潇郑燕李冬姜广水
- 关键词：唾液分泌型免疫球蛋白A
