李鹏飞
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：武汉生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 登革病毒疫苗研究进展被引量：1
- 2012年
- 登革病毒属黄病毒属,可通过蚊虫传播,感染人体后可引发一系列临床症状,从轻微发热到严重的并发症,称为登革热、登革出血热以及登革休克综合征。过去50年,全球登革热感染病例增加了约30倍。目前,全球热带、亚热带地区约占世界2/5的人口存在感染风险。由于缺乏有效的治疗药物,疫苗研究已成为登革热疾病防控的重心。然而,由于缺乏对病毒致病机理及病毒感染免疫应答深入的了解,候选疫苗的研发受到阻碍。但经过几十年的努力,疫苗研究取得了明显进展。目前正在研究的登革病毒疫苗依托各种技术平台,种类多样,对正处于临床前研究及临床试验阶段的不同类型疫苗进行阐述。
- 李鹏飞申硕
- 关键词：登革病毒免疫动物实验
- 柯萨奇病毒A6型VP1和VP2基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：4
- 2018年
- 目的构建柯萨奇病毒A6型(coxsackie virusA6,CVA6)VP1和VP2基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备抗CVA6VP1和VP2兔抗血清。方法逆转录PCR扩增CVA6VP1和VP2基因片段,整合入表达载体pGEX-6p-1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,经过大型SDS-PAGE制备电泳并进行切胶回收纯化,纯化后的融合蛋白GST-VP1和GST-VP2分别免疫家兔,获得兔抗血清。Westernblot(WB)和间接免疫荧光试验(indirectimmunofluorescence assay,IFA)鉴定抗体。结果CVA6VP1和VP2原核表达载体经PCR、双酶切和测序鉴定正确,获得了高纯度的CVA6VP1和VP2融合蛋白,WB和IFA鉴定多克隆抗体制备成功。结论成功构建了CVA6VP1和VP2原核表达载体,获得了重组的CVA6VP1和VP2蛋白及其多克隆抗体。
- 陈静陈静李鹏飞吴杰孟胜利申硕
- 关键词：VP1VP2原核表达多克隆抗体
- 柯萨奇病毒A6病毒样颗粒的制备及免疫原性初步研究
- 2020年
- 手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一种常见传染病,以婴幼儿发病为主,柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)是引起HFMD暴发的主要病原体,其疫苗开发有待深入的研究,而病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是潜在安全的候选疫苗。为制备CV-A6 VLPs,并研究其免疫原性,本研究利用Bac-toBac昆虫细胞杆状病毒表达系统共表达P1和3CD蛋白,制备并纯化CV-A6 VLPs,应用间接免疫荧光试验(Indirect immunofluscent assay,IFA)、SDS-PAGE、Western Blot、透射电镜法等方法鉴定。以Al(OH)3为佐剂,三种不同剂量CV-A6 VLPs免疫BALB/c小鼠,采用微量中和试验法检测小鼠血清中和抗体滴度。结果显示,重组有P1和3CD的杆状病毒质粒转染Sf9细胞,可形成CV-A6类病毒颗粒,直径约为26nm。SDS-PAGE和Western Blot结果说明P1前体蛋白被3CD作用切割产生了VP0、VP1和VP3,CV-A6 VLPs由这三个病毒结构蛋白构成。小鼠免疫实验结果显示,CV-A6 VLPs可以刺激产生较高水平抗CV-A6的特异性中和抗体,维持至少12周,并且抗体中和效价与免疫剂量和免疫次数呈正相关。本研究获得重组杆状病毒rBac-CV-A6-P1-3CD,并在Sf9细胞内成功表达CV-A6 VLPs,可以刺激小鼠产生较高水平和持久的体液免疫反应。
- 陈静李波李鹏飞陈易吴杰王泽鋆孟胜利申硕
