张华光
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 蓖麻蚕乙酰胆碱酯酶基因Pcrace2的克隆及序列与表达分析被引量：6
- 2013年
- 昆虫乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC 3.1.1.7)是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的作用靶标。利用RT-PCR和RACE技术从蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)幼虫头部组织克隆了乙酰胆碱酯酶基因Pcrace2。该基因cDNA全长为2 051 bp,包含1 497 bp的ORF,编码498个氨基酸,蛋白质的分子质量为56.25 kD,等电点(pI)为5.11,含有由23个氨基酸组成的前体信号肽,推测为分泌型蛋白质。基于PcrAChE2同源氨基酸序列的系统进化分析表明:蓖麻蚕与小菜蛾(Plutella xy-lostella)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)、烟青虫(Helicoverpa assulta)的亲缘关系最近,与家蚕(Bombyx mori)和野桑蚕(Bombyxmandarina)的亲缘关系也比较近。利用Real-time PCR方法分析Pcrace2基因在蓖麻蚕5龄第3天幼虫的头部、脂肪体、丝腺、中肠和血液中均有表达,以头部的表达量最高;在蓖麻蚕不同发育时期,Pcrace2在蛾期的表达量明显高于其它发育时期,在5龄幼虫期的表达量最低。研究结果有助于进一步分析蓖麻蚕乙酰胆碱酯酶基因的功能。
- 刘娟张月华张华光高丽钱荷英孙平江徐安英
- 关键词：蓖麻蚕乙酰胆碱酯酶基因克隆表达谱实时定量PCR
- 家蚕碱性丝氨酸蛋白酶基因Asp的克隆及在不同耐氟性家蚕组织中的表达差异
- 2013年
- 在家蚕耐氟近等基因系SSH文库中发现一条差异表达的EST序列。以家蚕耐氟近等基因系群体的幼虫中肠cDNA为模板,利用RACE技术克隆了该基因的全长cDNA序列,将该基因命名为Asp(GenBank登录号:JX312360)。该基因cDNA全长868 bp,包括20 bp的5'-UTR和77 bp的3'-UTR,ORF为771 bp,编码256个氨基酸。该基因由4个外显子和3个内含子组成,编码蛋白质为亲水性蛋白,属于丝氨酸蛋白酶家族,在第17～18氨基酸残基处存在信号肽切割位点。荧光定量PCR检测该基因在家蚕耐氟近等基因系群体幼虫的中肠、脂肪体及马氏管中都有表达,以中肠的表达量最高,表达量因个体的耐氟性而存在差异:中肠中,敏感个体的表达量是耐氟个体的2.49倍;脂肪体中,敏感个体与耐氟个体之间的表达量差异不显著;马氏管中,敏感个体的表达量是耐氟个体的8.16倍。该基因在不同耐氟性家蚕品种5龄幼虫中肠的表达量存在极显著差异,在耐氟性品种的表达量是氟敏感品种的50倍。研究结果提示,该碱性丝氨酸蛋白酶基因可能与家蚕的耐氟性有一定的关联。
- 张华光吴萍徐安英钱荷英张月华孙平江王小强
- 关键词：家蚕荧光定量PCR
