李连科
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：解放军第322医院更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- DOC-1基因的原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化被引量：4
- 2007年
- 目的:克隆DOC-1基因、构建原核表达载体并纯化出其重组蛋白。方法:从人胎脑组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增DOC-1的CDS序列,再通过基因重组技术将该基因片段依次克隆到pMD18-T和pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-1-DOC-1,经酶切、测序鉴定后,用该重组质粒转化E.coliBL21,用IPTG诱导表达,GlutathioneSepharose4B柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因DOC-1长度一致,测序结果与GenBank公布的DOC-1基因序列完全一致,IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量38000左右出现新的蛋白表达条带,经亲和层析柱纯化后得到高纯度的GST-p12重组蛋白。结论:成功构建了pGEX-4T-1-DOC-1原核表达载体,表达并纯化出GST-p12重组蛋白,为进一步研究p12DOC-1蛋白打下了实验基础。
- 邵小钧孙沫逸李连科陈伟杨耀武李建虎
- 关键词：基因克隆基因表达
