吴彬
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 活体内磷脂酰胆碱替代磷脂酰乙醇胺影响E.coli细胞的功能
- 2010年
- 【目的】通过磷脂酰胆碱(PC)阳性大肠杆菌菌株与磷脂酰乙醇胺(PE)阳性野生型和PE阴性突变型菌株比较,并用PC+PE+双阳性菌株佐证,从细菌形态、生理生化以及巨噬细胞对细菌的吞噬作用等方面探讨活体内磷脂酰胆碱能否替代磷脂酰乙醇胺。【方法】光学和电子显微镜观察细菌形态和结构;不同条件培养细菌并使用分光光度计测定OD600值,评估细菌的生长情况;使用SDS-PAGE和2-D电泳法测定细菌间质蛋白组分;用小鼠RAW264.7巨噬细胞系检测细菌的粘附和吞噬作用。【结果】与短棒状的PE+野生型细菌AD93/pDD72相比,PC+细菌AD93/ptac67中仍有25%丝状体;与PE-突变体AD93一样,PC+细菌AD93/ptac67仍需要添加二价离子Mg2+或Ca2+才能生长;与野生型AD93/pDD72相比,PC+细菌AD93/ptac67的周质蛋白组分、粘附率与相对吞噬效率呈现明显的差异;与野生型细菌Top10/ptac85相比,PE+PC+双阳性细菌Top10/ptac66的细胞壁外层、抗逆性和周质蛋白组分也显示差别。【结论】在活体内,膜磷脂中PC替代PE不能使PE-突变体细胞的功能完全恢复至野生型状态,PE和PC在功能上存在明显的差别,两者在功能上不能相互替代。
- 吴彬叶青李洋李昌瑜喻雪婧周舒王行国
- 关键词：磷脂酰胆碱磷脂酰乙醇胺大肠杆菌
- 土壤假单胞菌593使用Pcs途径合成磷酯酰胆碱
- 2011年
- 【目的】原核生物有两条代谢途径N-甲基化途径(Pmt途径)和磷脂酰胆碱合酶途径(Pcs途径)合成磷脂酰胆碱(PC)。本文对土壤细菌Pseudomonas sp.593的磷脂酰胆碱合成进行了研究,试图弄清楚假单胞菌的磷脂酰胆碱的合成途径。【方法】通过氨基酸序列比较,获得已报道的磷脂酰胆碱合酶(Pcs)的氨基酸保守序列,并设计简并引物,从Pseudomonas sp.593总DNA中PCR扩增出磷脂酰胆碱合酶基因(pcs)的片段,然后用扩增的DNA片段作探针,对Pseudomonas sp.593基因组DNA亚克隆文库进行菌落原位杂交,获得pcs全基因序列;利用同源重组原理进行活体突变,获得Pseudomonas sp.593 pcs-突变体;采用薄层层析(TLC)法分析细菌总磷脂,检测PC含量以及pcs基因活性。【结果】TLC分析显示Pseudomonas sp.593细菌仅在添加外源胆碱的M9或LB培养基中生长时才合成PC;从Pseudomonas sp.593细菌中克隆出894 bp的DNA序列,编码的蛋白具有磷脂酰胆碱合酶活性;活体缺失pcs基因后,Pseudomonas sp.593 pcs-突变体在添加或不添加胆碱的条件下都不能合成PC。【结论】Pcs途径是土壤Pseudomonas sp.593乃至其它假单胞菌合成磷脂酰胆碱的唯一途径。
- 熊敏吴彬何火光李洋王行国
- E.coliPC^+PE^-菌株AD93/ptac67的构建及其生物学性质被引量：1
- 2009年
- 将螺旋菌Borrellia.afzelii编码的磷脂酰胆碱合成酶基因(pcs)导入磷脂酰乙醇胺阴性菌株E.coliAD93(PE-)获得磷脂酰胆碱阳性、磷脂酰乙醇胺阴性的菌株E.coliAD93/ptac67(PC+PE-).生理生化特性调查显示:AD93/ptac67菌株的生长需要高于10 mmol/L的Mg2+,而对照细菌AD93则需要高于20 mmol/L的Mg2+,AD93/pDD72菌株则不需要;AD93/ptac67与AD93 SDS的MIC值为0.02%,比AD93/pDD72低约10倍;5%NaCl完全抑制AD93/ptac67的生长,3%NaCl则几乎完全抑制AD93的生长,而NaCl浓度为5%时,AD93/PDD72菌株仍能生长;SDS-PAGE图谱显示3种菌株的周质蛋白差异显著,而外膜蛋白差异不明显.在活体细菌中,磷脂酰胆碱替代磷脂酰乙醇胺并不能使缺少磷脂酰乙醇胺的突变体恢复至野生型状态,显示磷脂酰胆碱不能完全替代磷脂酰乙醇胺的功能.
- 李昌瑜喻雪婧叶青吴彬李洋王行国
- 关键词：磷脂酰胆碱磷脂酰乙醇胺
