刘攀峰
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 小菜蛾颗粒体病毒PP31与两种宿主蛋白发生相互作用被引量：1
- 2012年
- 在病毒侵染和复制过程中,病毒与宿主之间存在广泛的蛋白质-蛋白质相互作用。本研究建立了一个小菜蛾幼虫cDNA文库,用于筛查与小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)蛋白相互作用的小菜蛾幼虫蛋白。pp31同源基因存在于所有鳞翅目昆虫杆状病毒。其编码产物是一种磷蛋白,与病毒基因表达调控相关。本研究通过酵母双杂交实验从小菜蛾幼虫cDNA文库中筛选出两个与PlxyGV PP31相互作用的蛋白质基因。序列分析结果显示这两个基因的预期编码产物分别是小菜蛾蛋白激酶C受体(RACK)和一种甲硫氨酰氨肽酶2(MetAP2)同源蛋白。原核表达和蛋白质纯化实验结果显示,rack与6-组氨酸编码序列的融合基因的表达产物是一个38kD多肽。在GST-pulldown实验中,RACK蛋白随同GST-PP31融合蛋白一起吸附于GST亲和树脂,进一步证实了小菜蛾RACK蛋白与PlxyGV PP31发生相互作用。
- 刘攀峰王思民刘音黎路林
- 关键词：小菜蛾颗粒体病毒
- 草地贪夜蛾细胞系IPLB-Sf-9酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：7
- 2009年
- 草地贪夜蛾Spdoptera frugiperda是危害玉米、高粱等农作物的重要害虫。草地贪夜蛾卵巢细胞系IPLB-Sf-9(Sf9)广泛应用于病毒学研究和真核生物基因表达。本研究从Sf9细胞中提取总RNA,应用SMARTTM技术,构建以pGADT7-Rec为载体的Sf9细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库。Sf9细胞总RNA的电泳谱型与哺乳动物总RNA存在差异,其28S rRNA带弱于18S rRNA带,所合成的原始ds cDNA大小为0.1～4kb。文库展现良好的多态性,载体质粒插入的cDNA片段大小大部分在0.3～2kb之间。Sf9细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库的构建为草地贪夜蛾功能基因的识别和鉴定,为研究杆状病毒与宿主细胞的互作机制提供了重要研究工具。
- 王春苗钟雪萍刘攀峰黎路林
- 关键词：SF9细胞CDNA文库酵母双杂交昆虫细胞系
