李小勤
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
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- 筛选和鉴定抗卵巢癌活性六肽的靶点蛋白
- 2014年
- 目的采用pull-down技术筛选乳源抗癌六肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行鉴定。方法以PGPIPN的序列为参照,设计出PGPIPN基因,以BamHⅠ/XhoⅠ为酶切位点,将PGPIPN基因构建到表达质粒载体pGEX-4T-1中,转化到E.coli BL21中,用诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)低温诱导表达的谷胱甘肽S转移酶(GST)标签融合蛋白作为诱饵蛋白;从SKOV3中提取的总蛋白作为捕获蛋白,运用GST pulldown技术,筛选出靶点蛋白质,运用SDS-PAGE电泳进行初步鉴定,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的PGPIPN孵育鉴定。结果 SDS-PAGE电泳中有两条条带,一条为诱饵蛋白,一条为目的条带,在免疫荧光显微镜下观察到荧光PGPIPN结合到该条带上。结论筛选和鉴定了PGPIPN作用于卵巢癌细胞上的靶蛋白,为研究其抗癌的作用机制及其信号转导通路奠定了基础。
- 李小勤唐宜桂刘琛雷婷秦宜德
- 关键词：GST诱饵蛋白
- 乳源抗菌-免疫调节融合肽对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响
- 2014年
- 目的研究乳源抗菌-免疫调节融合肽(AIFP)对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用MTT法测定AIFP对卵巢癌细胞株SKOV3细胞和原代培养的卵巢癌细胞增殖的影响;流式细胞术测定AIFP对SKOV3细胞和原代卵巢癌细胞凋亡、周期的影响;并用RT-PCR检测AIFP对SKOV3细胞及原代癌细胞凋亡和周期相关基因表达水平的影响,以探讨其可能机制。结果 MTT法显示,AIFP对卵巢癌细胞的增殖具有抑制作用,且具有时间和剂量依赖性,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,AIFP诱导卵巢癌细胞的凋亡,具有剂量和时间依赖性,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。RT-PCR结果表明,AIFP可以影响细胞凋亡和细胞周期相关基因(Akt、CDC25C和cyclinB1)的表达。结论 AIFP上调卵巢癌细胞凋亡和周期相关基因Akt、CDC25C和cyclinB1的表达,对卵巢癌细胞株SKOV3具有抑制增殖和促进凋亡的作用。
- 唐宜桂李小勤刘琛雷婷秦宜德
- 关键词：SKOV3增殖凋亡
- β-酪啡肽-7对小鼠酒精性肝损伤防治作用的研究被引量：8
- 2013年
- 目的研究β-酪啡肽-7(β-CM-7)对小鼠酒精性肝损伤的防治作用。方法 60只昆明♂小鼠随机分为6组(每组10只):对照组、模型组、护肝片组(0.3 g.kg-1)、β-CM-7高剂量组(灌胃剂量:2.0×10-1g.L-1)、β-CM-7中剂量组(灌胃剂量:2.0×10-2g.L-1)和β-CM-7低剂量组(灌胃剂量:2.0×10-3g.L-1),除对照组外均采用梯度酒精灌胃的方法建立酒精性肝损伤动物模型,同时除模型组外各组分别给予药物治疗12周。观察用药前后各组小鼠生化指标血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平的变化。结果β-CM-7高剂量组能够明显降低酒精性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、TG、LDL-C水平(P<0.05或P<0.01),提高血清HDL-C的含量,减少肝组织匀浆的MDA含量(P<0.05或P<0.01),升高肝匀浆SOD,GSH-Px的水平(P<0.05或P<0.01)。结论β-酪啡肽-7对小鼠酒精性肝损伤有防治作用,可能与其调节脂质代谢。
- 顾芳周艳杨浩然魏彩唐宜桂李小勤秦宜德
- 关键词：小鼠酒精性肝损伤生化指标自由基
- 乳源免疫调节肽对小鼠酒精性脂肪肝的防治作用被引量：2
- 2013年
- 目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对小鼠酒精性脂肪肝的防治作用。方法 60只昆明种雄性小鼠,随机均分为对照组、模型组、护肝片(0.3 g/kg)组、PGPIPNⅠ组、Ⅱ组和Ⅲ组。采用梯度乙醇溶液灌胃的方法建立小鼠酒精性脂肪肝(AFL)模型,造模的同时给予药物干预,共12周。实验结束后,处死小鼠,收集血清和肝脏。测定小鼠肝指数(LI)、脾指数(SI)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)及高密度脂蛋白(HDL-C)和肝组织中甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量,并观察肝脏病理组织学变化。结果 PGPIPN各剂量组均能显著降低AFL小鼠LI和SI水平、血清中ALT和AST的活性,减少血清中TG、TC及LDL-C和肝组织中TG、MDA含量,升高HDL-C、SOD含量和GSH-PX活性水平;同时,病理组织学检查结果显示,PGPIPN各剂量组小鼠肝脏中小泡性脂肪变性程度明显减轻。结论PGPIPN对酒精性脂肪肝小鼠有防治作用,其机制可能与其调节脂质代谢,抗脂质过氧化有关。
- 杨浩然魏彩唐宜桂李小勤刘琛顾芳秦宜德
- 关键词：酒精性脂肪肝脂质过氧化肝脏脂肪变性
- 筛选和鉴定抗卵巢癌活性六肽的靶点蛋白
- 目的利用pull-down技术和双向电泳两种技术来筛选乳源抗癌六肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行质谱分析鉴定。方法以PGPIPN的序列为参照,设计出了PGPIPN基因,以BamH...
- 李小勤
- 关键词：双向电泳电喷雾质谱
- 文献传递
