周洲
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目更多>>
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- shRNA沉默多药耐药胃癌细胞7901/VCR MDR1基因表达的实验研究被引量：3
- 2009年
- 目的利用RNAi技术干扰胃癌多药耐药细胞(7901/VCR)多药耐药基因(MDR1)的表达,为临床肿瘤的基因治疗奠定基础。方法根据MDR1的碱基序列设计并合成两对短发夹RNA,构建重组载体,用阳离子脂质体法体外转染7901/VCR;采用MTT法检测转染胃癌细胞的生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,RT-PCR和Western blot检测转染前后MDR1 mRNA和蛋白表达的变化。结果成功构建RNAi质粒载体,转染后细胞IC50明显降低(P<0.05);G1期细胞增加,S期细胞减少(P<0.05);MDR1 mRNA转录水平下降(P<0.05),P-糖蛋白(P-gp)的表达水平降低(P<0.05)。结论RNAi能明显抑制胃癌细胞7901/VCR MDR1mRNA和P-gp蛋白的表达,进而对肿瘤细胞多药耐药性有明显的逆转作用,为基因治疗提供了一种新的手段。
- 周洲姜政周静陶小红黄爱龙王丕龙
- 关键词：P糖蛋白基因表达
- 重组人脂联素基因在减毒沙门氏菌中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建携带人脂联素(AdipoQ)基因真核表达载体并在减毒沙门氏菌中表达,为AdipoQ对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的基因治疗提供依据.方法:从人脂肪组织中提取总RNA,通过实时荧光定量PCR(rRT-PCR)方法获得Adi-poQ基因并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,构建pEG-FP-N1-AdipoQ重组载体.重组质粒经鉴定后再电转入减毒沙门氏菌SL7207中表达.结果:克隆的人AdipoQ基因744bp测序结果显示:1个碱基发生突变,654位:A→T,突变率为0.1%,氨基酸Glu→Asp.经SDS-PAGE,Western Blot检测融合蛋白Mr约为55×103(绿色荧光蛋白Mr约为27×103),能够被AdipoQ抗体识别.结论:成功构建携带AdipoQ基因真核表达载体的减毒沙门氏菌株,AdipoQ基因能够在减毒沙门氏菌中表达并与绿色荧光蛋白融合.为进一步研究其在NAFLD中的作用机制奠定了基础.
- 周静周洲吴莹向廷秀姜政王丕龙
- 关键词：脂联素沙门菌属疫苗减毒
- 重组人脂联素基因在L02细胞中的表达及其对肝脂肪变的预防作用
- 2010年
- 目的观察携带人脂联素（AdipoQ）基因真核表达载体是否能在人正常肝细胞株L02中表达，并探讨其对体外诱导肝细胞脂肪变的预防作用及其意义，为AdipoQ在非酒精性脂肪肝病的基因治疗中奠定基础。方法将构建含人AdipoQ重组载体pEGFPN1AdipoQ转染L02细胞（L02／pEGFPN1AdipoQ组，力=10），与pEGFP—N1空质粒转染L02细胞（L02／pEGFP—N1组，力=10）以及L02正常细胞株（L02组，力=10）为对照，分别加入浓度为20μg／ml的油酸进行培养72h，用油红O染色观察细胞内脂滴，并检测细胞内甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）和甘油的含量。采用SAS8．2软件进行统计分析，3组之间总体差异的检验采用单因素方差分析，3组之间两两比较采用SNK—q检验。结果含人AdipoQ重组载体pEGFP—N1-AdipoQ能够在L02细胞株中表达，油红O染色显示72hL02组和L02／pEGFP-N1组分别比L02／pEGFP-N1-AdipoQ组脂肪变性更为明显。L02组、L02／pEGFP—N1组和L02／pEGFP—N1一AdipoQ组，TG含量分别为（89．23±18．45）μmol／L、（78．66±16．38）mol／L和（26．58±7．65）μmol／L，FFA含量分别为（85．39±17．26）mol／L、（75．63±12．25）μmol／L和（25．37±8．73）mol／L，甘油含量分别为（62．29±13．59）umol／L、（57．35±18．43）μmol／L和（15．37±7．53）μmol／L，F值分别为50．58、59．37、34．32，雅均〈0．01。在L02／pEGFP-N1组中TG、FFA和甘油含量均明显高于L02／pEGFP-N1-AdipoQ组，t值分别为7．81、8．50、6．75，尸值均〈0．01。在L02组中TG、FFA和甘油含量均显著高于L02／pEGFP-N1-AdipoQ组，t值分别为9．39、10．15、7．54，尸值均〈0．01。TG、FFA和甘油含量在L02／pEGFPN1组和L02组之间，差异无统计学意义。结论携带人脂联素基因真核表达载体能够在L02细胞株中表达，而且具有预防肝脂肪变性的作用。
- 周静孙伟周洲吴莹向延秀姜政陶小红黄爱龙王丕龙
- 关键词：脂肪肝脂联素L02细胞
- pshRNA-MDRla联合TRAIL基因对胃癌细胞株SGC7901/VCR作用及其作用机制的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨pshRNA-MDRla联合pBUD-TRAIL,在体外对胃癌细胞SGC7901/VCR增殖和凋亡的作用及机制,为肿瘤的基因治疗奠定基础。方法:以人胃癌SGC7901/VCR细胞株为研究对象,将pshRNA-MDRla与pBUD-TRAIL共同转染胃癌SGC7901/VCR细胞并在VCR中培养,同时与pshRNA-MDRla组、pBUD-TRAIL组、SGC7901/VCR和空质粒组相比较,以MTT法检测细胞增殖抑制率、以FCM检测细胞凋亡率以及TUNEL法检测细胞凋亡等,观察联合应用组对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果:MTT法显示:对照组(pBUD-TRAIL、pshRNA-MDRla、空质粒和SGC7901/VCR组)胃癌细胞的生长抑制率分别为45%、30%、10%和10%,联合实验组抑制率为70%;FCM检测显示:对照组胃癌细胞的凋亡率分别为25.96%、10.27%、5.96%和4.25%,联合实验组凋亡率为41.23%;与对照组相比,联合实验组抑制率和凋亡率都具有显著性差异;TUNEL检测结果显示:联合组与其他对照组相比较,细胞核明显棕黄色深染,且阳性染色细胞数目明显增多,表明pBUD-TRAIL与pshRNA-MDRla联合作用,凋亡细胞明显增加。结论:pshRNA-MDRla联合pBUD-TRAIL可显著抑制肿瘤细胞的增殖和促进肿瘤细胞的凋亡,推测与pshRNA-MDRla阻止TRAIL外排有关,从而增强TRAIL促进肿瘤细胞凋亡的作用,两者具有协同作用。
- 袁媛周洲周静姜政黄爱龙王丕龙
- 关键词：增殖凋亡
- TGF-β1真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建人转化生长因子-β1(TGF-β1)的真核表达载体,并检测其融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达,为阐明TGF-β1在肝纤维化发生、发展中的作用以及建立相应的基因沉寂治疗途径奠定基础.方法:从人的肝脏组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法获得人TGF-β1基因,将其克隆到真核荧光表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1,转染真核表达细胞COS-7中,通过荧光显微镜检测其表达,RT-PCR和Western Blot检测TGF-β1基因在真核细胞中的表达.结果:通过RT-PCR方法克隆人TGF-β1基因为1173bp,与目的基因片段大小相一致;测序结果显示,于531位有1个碱基突变:T→C,为无义突变.通过RT-PCR和Western Blot检测到TGF-β1基因的表达,其融合蛋白分子质量约为52ku(绿色荧光蛋白分子质量约为27ku),说明重组质粒在COS-7细胞内正常表达.结论:成功的构建了真核表达质粒pEGFP-N1-TGF-β1,并在真核细胞COS-7中表达,为进一步研究其在肝纤维化的基因治疗中奠定了基础.
- 于宏周静孙伟周洲吴莹姜政王丕龙
- 关键词：肝星形细胞转化生长因子转染
