王蕾
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：苏州大学附属第一医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人VSIG4基因转染细胞的构建及其对T细胞的共刺激效应的初步研究被引量：3
- 2009年
- 目的:分别构建含有人VSIG4基因两种不同变异体(VSIG4L和VSIG4S)的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达VSIG4L和VSIG4S基因的L929细胞并初步研究其对T细胞的共刺激作用及可能机制。方法:从人肺cDNA文库中扩增出VSIG4L和VSIG4S的全长基因,并分别克隆入T载体中,再双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-Term中,与辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,以其培养上清感染L929细胞72小时后,经Zeocin筛选出稳定表达VSIG4L或VSIG4S分子的L929细胞株;采用RT-PCR和流式细胞仪分析VSIG4分子的表达,MTT和ELISA分别检测T细胞增殖及IL-2的分泌。结果:构建了含人VSIG4L基因和VSIG4S基因的重组逆转录病毒载体,并获得含有VSIG4L基因和VSIG4S基因的重组病毒,筛选获得能稳定高表达人VSIG4L和VSIG4S分子的L929转基因细胞;该转基因细胞具有体外抑制T细胞增殖、活化和IL-2分泌的作用。结论:构建了稳定表达人VSIG4L和VSIG4S膜型分子的细胞株,该分子两种不同变异体在体外均可抑制T细胞增殖和IL-2分泌。
- 张世杰王蕾王月颖蒋靓蒋玉平高超张学光顾宗江
- 关键词：逆转录病毒基因转染共刺激分子
- 人VSIG4-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究被引量：2
- 2009年
- 为获取人VSIG4-Fc融合蛋白,并研究其对T细胞的调节效应。首先采用PCR获取人VSIG4基因的胞外段序列及人IgG1Fc恒定区序列,将两者顺次连接插入逆转录病毒载体,以293T为包装细胞,制备含病毒颗粒的培养上清,反复感染CHO细胞,Zeocin筛选能稳定分泌VSIG4-Fc蛋白的基因转染细胞并以RT-PCR、Dot-blot及Western blot等鉴定。以MTT和ELISA分别检测VSIG4-Fc融合蛋白对T细胞增殖及IL-2分泌的影响。结果成功获取了CHO基因转染细胞,该细胞能稳定分泌VSIG4-Fc蛋白,纯化后的VSIG4-Fc蛋白能与T细胞表面未知受体结合,并具有体外抑制T细胞增殖、活化和IL-2分泌的作用。
- 张世杰王蕾王月颖李道明朱守兵蒋玉平蒋靓张学光顾宗江
- 关键词：逆转录病毒融合蛋白共刺激分子
- 两株鼠抗人VSIG4单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究
- 2010年
- 目的:制备鼠抗人VSIG4分子单克隆抗体(mAb)及对其生物学特性进行鉴定。方法:以高表达膜型VSIG4分子的基因转染细胞L929/VSIG4L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经流式细胞术检测和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人VSIG4分子的杂交瘤细胞株;采用间接免疫荧光法、Westernblot、竞争抑制试验及MTT增殖试验等对单抗的生物学特性进行鉴定。结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人VSIG4mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为9A7和9D5。对mAb生物学特性的研究结果表明,2株mAb均能识别巨噬细胞以及Jurkat、THP-1、H446等肿瘤细胞株表面的VSIG4分子。对T细胞增殖抑制的阻断实验显示,这2株抗体对VSIG4分子抑制T细胞增殖均有阻断作用。结论:成功地获得了2株鼠抗人VSIG4功能性mAb,为进一步研究VSIG4及其未知受体的生物学功能奠定了基础。
- 张世杰王蕾汪家敏陈曦蒋靓王月颖胡玉敏张学光顾宗江
- 关键词：杂交瘤单克隆抗体巨噬细胞
