杨凤
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：绵阳师范学院动物应用技术研究所更多>>
- 发文基金：国家生猪现代产业技术体系建设项目四川省自然科学基金四川省教育厅资助科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立被引量：6
- 2017年
- 为建立一种快速、灵敏、简便的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测方法,本研究利用逆转录环介导恒温扩增技术(RT-LAMP),针对PRRSV的ORF5基因片段设计了4条引物,利用Bst DNA聚合酶在65℃恒温条件下进行逆转录扩增,通过1.0%琼脂糖凝胶电泳和加入SYBR GreenⅠ染料肉眼判断结果,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。结果表明,该检测方法具有良好的特异性,与其他常见病毒如猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒等无交叉反应,较普通RT-PCR灵敏性高100倍。采用RT-LAMP和RT-PCR分别对10份临床样本同时进行检测,符合率为100%。因此,本研究建立的RT-LAMP是一种可适用于临床PRRSV检测的快速、简单、灵敏、特异的检测方法。
- 陈希文汪谦尹苗李莲罗文涛杨凤郭爱伟周杰珑王雄清
- 基于PEDV M基因RT-LAMP快速检测方法的建立与应用被引量：4
- 2018年
- 为建立一种快速、灵敏、方便的猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）早期诊断方法,本研究针对PEDV的M基因片段设计了4条引物,对反应体系的时间、温度进行了优化,对试验的特异性和敏感性进行了评估,初步建立了逆转录环介导恒温扩增技术（RT-LAMP）。结果表明,建立的PEDV RT-LAMP方法在65℃恒温下扩增60min,可通过琼脂糖凝胶电泳或SYBR Green I染料肉眼判断结果,灵敏性较普通RT-PCR高100倍。该方法与猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（PoRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪瘟病毒（CSFV）等无交叉反应,具有良好的特异性。采用该RT-LAMP对100份临床疑似发病粪便拭子、小肠组织、初乳样本进行检测,结果较RT-PCR更灵敏。因此,本研究初步建立了可用于临床PEDV检测的RT-LAMP检测方法,为PEDV的临床快速诊断和综合防控提供了一种新的手段。
- 陈希文尹苗汪谦杨勤杨凤李莲罗文涛周杰珑马缨赵洪
- PEDV、TGEV二重RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2018年
- 为了能快速灵敏地确诊临床腹泻仔猪的病原,试验采用分子生物学方法对基于猪流行性腹泻病毒（PEDV）M基因（KJ778616.1）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）N基因（GQ374566.1）的二重RTPCR检测方法进行了研究。结果表明：建立的二重RT-PCR检测方法能同时扩增鉴别PEDV和TGEV两个病原;该方法的特异性强,与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病毒（PRV）和猪轮状病毒（PoRV）等病毒间不存在交叉反应;敏感性高,PEDV的最低稀释度为1×10^-5,TGEV的最低稀释度为1×10^-4;应用建立的方法对36份临床腹泻仔猪粪便拭子、小肠组织和乳汁等样品进行检测,结果与商品化试剂盒的符合率为100%。说明试验成功建立了能同时检测并鉴别PEDV和TGEV的二重RT-PCR方法,该方法快速、准确、灵敏,在临床发病样品中应用效果良好,适合在疑似PEDV和TGEV发病猪场中推广应用。
- 陈希文杨双燕李莲李莲杨勤尹苗罗文涛杨凤赵洪
- 关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒
