吴爱华
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HoxB8对结直肠癌细胞生长迁移的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:通过构建过表达Hox B8基因的慢病毒表达载体,研究Hox B8基因对结直肠癌细胞生长迁移的影响。方法:采用PCR技术扩增出人Hox B8基因全长,通过限制性内切酶Eco R I和SAC II双酶切,T4DNA连接酶连接,克隆至慢病毒载体,构建Lenti-Hox B8-GFP重组载体。重组阳性克隆进行PCR和酶切鉴定,测序验证序列正确。将重组载体质粒以及3个辅助质粒共转染人肾上皮细胞(293T)进行慢病毒包装,收集病毒颗粒。然后将病毒颗粒感染结直肠癌细胞RKO,并将RKO细胞分为转染组(转染慢病毒重组质粒LentiHox B8-GFP)、对照组(转染空白质粒Lenti-GFP)和空白对照组。RT-PCR和Western blot法检测病毒感染后 Hox B8在细胞中的表达情况。MTT、平板克隆形成实验和Transwell小孔试验检测过表达Hox B8基因对结直肠癌细胞生长迁移的影响。结果:经鉴定显示重组载体质粒构建成功,测序正确。293T细胞高效包装LentiHox B8-GFP慢病毒,携带Hox B8基因的慢病毒感染RKO细胞后可看到大量绿色荧光,RT-PCR和Western blot法检测分别证实Hox B8基因和蛋白在转染组细胞中呈高表达。实验组细胞的增殖和平板克隆形成能力高于空白组及对照组。Transwell小孔试验结果显示Hox B8高表达能够促进结直肠癌细胞的转移。结论:成功构建Hox B8慢病毒表达载体,过表达Hox B8能够促进结直肠癌细胞的增殖、克隆形成以及迁移。
- 林飞燕吴爱华张培丽蒋磊李绍堂
- 关键词：慢病毒载体结直肠肿瘤实时荧光定量PCR
