孙晓琳
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室更多>>
- 发文基金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 鳞状细胞癌抗原SCCA基因的构建、表达及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:重组人鳞状细胞癌抗原(SCCA)的基因及表达融合蛋白,为下一步建立新的肝癌诊断方法奠定基础。方法:提取子宫颈癌细胞株(hela)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出SCCA基因,将其分别与PET-32a及PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆,并测序鉴定。异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转入工程质粒的BL21菌中表达SCCA融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果:经RT-PCR、PCR扩增后成功获得一条450 bp的DNA片段,经测序鉴定与预期序列一致;并成功在大肠杆菌中实现了高表达,经Western blotting鉴定为SCCA融合蛋白。结论:成功获得SCCA目的基因并获得高纯度的SCCA融合蛋白,为进一步开发针对肝癌的SCCA诊断试剂打下基础,开辟诊断肝癌新途径。
- 于华实孙晓琳张天竹李梅李淑珍唐晓波
- 关键词：肝癌克隆
