李猛
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 供职机构：宁波大学生命科学与生物工程学院教育部应用海洋生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 文蛤(Meretrix meretrix)C-型凝集素基因的分子克隆及表达分析
- C-型凝集素是一种重要的模式识别蛋白,本研究以文蛤为材料。利用PCR扩增和RACE技术首次获得了编码文蛤C-型凝集素的基因(Mm-CTL)cDNA序列,全长为1855bp,其开放阅读框为519bp,编码172 个氨基酸。
- 李猛周素明刘璐彭頔王国良
- 关键词：文蛤基因克隆生物信息学环境因子
- 三疣梭子蟹Toll样受体信号通路关键元件的分子克隆及表达分析
- Toll样受体(TLR,Toll like receptor)是近年发现的一类重要的模式识别受体,在抗病免疫应答过程中发挥重要作用。本研究从三疣梭子蟹血淋巴的cDNA中克隆到了一种Toll分子(Pt-Toll)以及Tol...
- 周素明刘顺李猛袁雪梅王国良
- 文蛤(Meretrix meretrix)C-型凝集素基因的分子克隆及表达分析被引量：11
- 2015年
- C-型凝集素是一种重要的模式识别蛋白,本研究以文蛤为材料。利用PCR扩增和RACE技术首次获得了编码文蛤C-型凝集素的基因(Mm-CTL)c DNA序列,全长为1855bp,其开放阅读框为519bp,编码172个氨基酸。Smart软件预测Mm-CTL的糖识别结构域(CRD)从第34个氨基酸到第168个氨基酸。BLASTP序列相似性分析显示,Mm-CTL与大竹蛏氨基酸序列同源性最高,相似性为56.5%,与其它无脊椎动物的相似性为13.5%—23.9%。系统进化树分析与同源分析结果一致,其中Mm-CTL与双壳类C-型凝集素聚在一起,与大竹蛏亲缘性最近。环境胁迫实验显示,溶藻弧菌感染6h时Mm-CTL表达量明显上升,在12h时达到最高值,随后有所下降。盐度胁迫时Mm-CTL在盐度5时表达量相对较低,在盐度10—20中的表达量相对较高。温度胁迫时Mm-CTL在35°C时表达量相对最高,10°C时表达量明显较低。研究结果表明,文蛤应对环境因子影响可通过调节Mm-CTL的表达来应答免疫反应。本研究将为贝类先天性免疫因子研究以及病害的防控奠定基础。
- 李猛周素明刘璐彭頔王国良
- 关键词：文蛤基因克隆生物信息学环境因子
- 三疣梭子蟹B型清道夫受体蛋白的原核表达及细胞、组织分布被引量：2
- 2018年
- B型清道夫受体是清道夫受体超家族成员,可识别多种配体,在机体脂类转运及免疫防御过程中发挥重要作用。为深入研究三疣梭子蟹B型清道夫受体(Pt-SRB)的功能,本实验在前期工作基础上构建了Pt-SRB胞外结构域原核表达载体,并成功获得了重组蛋白rPt-SRB。利用亲和层析方法获得纯化的rPt-SRB,并将纯化rPt-SRB蛋白免疫大鼠获得抗rPt-SRB重组蛋白免疫抗血清以用于后续研究。SDS-PAGE检测发现,体外诱导表达重组rPt-SRB以包涵体的形式出现在大肠杆菌BL21裂解液的沉淀中,分子量大小约为49.18 ku。Western-Blot分析表明,大鼠抗rPt-SRB血清能与rPt-SRB特异性结合。本实验还利用免疫荧光技术,对Pt-SRB在三疣梭子蟹血淋巴细胞的定位及不同组织中的分布进行研究。结果显示,Pt-SRB在三疣梭子蟹消化道、肝胰腺、鳃、心脏、肌肉组织中均有分布,但不同组织中Pt-SRB的分布不同。免疫荧光结果显示,绿色荧光信号在消化道及腺体结缔组织中较强,另外在肝小管上皮、鳃丝上皮细胞中亦有较强的阳性信号,表明PtSRB蛋白在上述组织结构中分布较广;在血淋巴细胞中,绿色荧光信号主要分布于细胞质和细胞膜,在细胞核中没有明显荧光信号,提示Pt-SRB在三疣梭子蟹血淋巴细胞的细胞质和细胞膜上表达。本结果将为三疣梭子蟹B型清道夫受体蛋白的生理及免疫学功能的研究奠定基础。
- 杨宁杨宁周素明王国良刘顺
- 关键词：三疣梭子蟹原核表达
