李桑
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外扩增后脐血来源Treg细胞的有效性及安全性研究被引量：1
- 2016年
- 通过检测扩增后调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)的有效性和安全性,研究脐血来源的CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的临床运用前景。实验中,新鲜分离的Treg细胞通过CD3/CD28抗体包被微磁珠进行体外扩增,以检测脐血来源Treg细胞的体外增殖能力,同时利用流式细胞术检测新鲜分离的Treg细胞与扩增后细胞的表型。随后,采用混合淋巴实验(mixed lymphocyte reaction,MLR)检测Treg细胞的功能,利用刺激实验检测扩增后Treg细胞的免疫原性,并且利用NOD-Prkdc^(scid)IL2rg^(null)免疫缺陷小鼠进行体内安全性检测。结果显示,4周后脐血来源的Treg细胞能够扩增到1 000倍以上,与新鲜分离的Treg细胞相比,扩增后的细胞CD45RA表达降低,CD45RO和CD39表达升高;同时,MLR结果显示扩增后的Treg细胞具有较强的抑制能力,并且免疫原性低;此外,体内结果显示扩增后的Treg细胞不会引起移植物抗宿主反应。实验结果初步表明,脐血来源体外扩增后的Treg细胞不仅在数量和功能上能够满足临床移植的需要,并且免疫原性低安全性高。
- 马小倩李桑王维
- 关键词：体外扩增
- 人源化异种肝组织移植小鼠模型中调节性T淋巴细胞归巢的成像研究被引量：1
- 2019年
- 目的探讨DiR荧光染料标记的调节性T淋巴细胞(Tregs)在异种肝组织移植小鼠体内的归巢特征.方法检测不同温育时间和不同质量浓度DiR染料标记的Tregs荧光强度,结合新型四唑化合物(MTS)实验检测细胞活力,从而确定最佳温育时间及染料质量浓度.采用流式细胞术验证DiR染料对Tregs功能及表型的影响.构建异种肝组织移植小鼠模型并免疫重建,回输Tregs后不同时间点进行小动物活体荧光成像.通过免疫组织化学分析免疫重建以及体内淋巴细胞分布情况.多组间比较采用单因素方差分析和Dunnett-t检验.结果随着DiR浓度和温育时间增加,Tregs荧光强度增强,3d达到高峰后逐渐减弱,5.00μg/ml及20.00μg/ml组相比对照组在各时间点的细胞活力显著下降(F=120.142~182.025,t=9.969~19.329,均P<0.05),温育30min及60min后,Tregs活力相较对照组也明显下降(F=21.826~301.968,t=6.897~40.016,均P<0.05),结合MTS实验结果得出最优标记条件为2.50μg/mlDiR染料温育5min.免疫表型流式细胞术检测表明DiR染料不影响Tregs表型及功能.小动物荧光成像系统检测到Tregs可以汇聚于移植物区域.免疫组织化学分析结果表明Tregs能改善免疫重建后诱导的淋巴细胞浸润情况.结论荧光成像可直接观察DiR染料标记的Tregs在小鼠体内的分布,是一种有前景的Tregs示踪的影像学手段.
- 杨敏马小倩李桑杨策军容鹏飞王维
