侯双利
- 作品数：4 被引量：33H指数：4
- 供职机构：吉林农业大学中药材学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 人参达玛烷二醇合成酶基因的克隆、序列特征和组织表达分析被引量：4
- 2015年
- 以五年生人参根组织为试验材料,利用RT-PCR方法克隆人参DS基因序列;通过生物信息学技术对其核苷酸序列和氨基酸序列进行比对;运用实时荧光定量PCR技术检测DS基因在人参根、茎、叶、果各部位的表达量。结果表明:获得人参DS基因c DNA全长,其核苷酸序列长为2.385 kb,含有1个开放阅读框,编码769个氨基酸多肽。生物信息学分析显示DS编码蛋白质包含1个跨膜区域,具有3个保守结构域。人参DS编码蛋白质与西洋参的DS(AGK62449)和三七的DS(AGI19258)具有99%的序列相似性。实时荧光定量PCR显示,DS基因在人参根、茎、叶、果各部位均有表达,在叶中表达量最高,其次是在果中,在根和茎中表达量相近。
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- 关键词：人参基因克隆人参皂苷
- 影响植物组织总RNA质量的因素被引量：12
- 2013年
- 随着大量生物领域科研人员进入植物RNA研究领域,开展RNA研究,使得以RNA为终产物的基因组研究取得突破性进展,新的RNA基因不断增加,RNA的新功能不断被发现。但由于RNA的不稳定性,使得RNA操作远比DNA操作困难,且尚有大量未知的RNA及其功能等待人们去探索、研究,而这些研究又都基于高质量RNA的提取。因此,根据笔者自身实验经验,及在查阅大量相关文献的基础上,针对植物总RNA提取的一些关键影响因素、消除对策、RNA检测方法及RNA保存方法上进行了系统的阐述,旨在为高质量植物组织总RNA的制备提供理论参考,为RNA分子生物学实验后续研究提供理论支撑。
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- 关键词：影响因素植物组织总RNA
- 人参鲨烯环氧酶基因的克隆与序列分析被引量：8
- 2014年
- 以五年生人参根组织为试验材料,提取总RNA,反转录合成cDNA,利用RT-PCR法对人参鲨烯环氧酶(SQE)基因的cDNA进行克隆及序列分析,初步探讨人参皂苷生物合成途径中的影响因子。结果表明:获得人参SQE基因全长片段大小为1 636 bp,开放阅读框长1 611 bp,编码536个氨基酸残基,与其他植物核苷酸序列具有较高同源性,其中与三七、龙牙惚木、刺五加同源性分别为98%、96%、90%。
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- 关键词：人参皂苷克隆生物合成RT-PCR
- 人参β-actin基因实时荧光定量PCR方法的建立被引量：11
- 2014年
- 目的建立人参β-actin基因实时荧光定量PCR的方法。方法根据GenBank上其他高等植物β-actin基因保守区域设计一对特异性引物,将从人参中PCR扩增得到的β-actin基因克隆到pMD20-T载体上构建重组质粒,经1/10梯度稀释后用于制定标准曲线,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验。结果该方法检测β-actin基因的最低拷贝数为43拷贝/μL,在较广的范围内（43~4.3×107拷贝/μL）有良好的线性关系（R2=0.995 3）;熔解曲线分析显示扩增产物为特异性单峰,其Tm值为（84.51±0.01）℃;5个不同浓度对照品组内试验变异系数为0.58%~2.79%,组间试验变异系数为2.61%~4.41%。结论该方法具有快速、灵敏、特异、高通量及重复性强等优点,为β-actin基因作为内参基因进行人参功能基因表达的定量分析提供了方法学基础。
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- 关键词：人参内参基因基因克隆实时荧光定量PCRSYBR
