孙明晶
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组的提取和双向电泳分离
- 2009年
- 目的提取小鼠肝细胞核磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳分离小鼠肝细胞核磷酸化蛋白。方法提取小鼠肝细胞核蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂纯化出磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并挑选其中一个蛋白斑点进行质谱分析。结果成功提取了肝细胞核磷酸化蛋白,通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组图谱。质谱鉴定结果证实被挑选蛋白斑点是小鼠核磷酸化蛋白。结论磷酸化蛋白纯化技术结合二维凝胶电泳分离技术是研究肝细胞核磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面研究和鉴定小鼠肝细胞核磷酸化蛋白的功能打下了基础。
- 夏高晓李红梅陈丽赵明哲胡水旺王继刚孙明晶邓鹏刘靖华姜勇
- 关键词：磷酸化蛋白质组双向凝胶电泳肝脏质谱
- 转甲状腺素蛋白真核表达载体的构建及其细胞内定位被引量：3
- 2009年
- 目的构建转甲状腺素蛋白(TTR)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达及定位。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到TTR编码序列,将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒pcDNA3-TTR-HA。重组质粒通过PCR、酶切测序等证明构建正确后经脂质体转染NIH3T3细胞,固定并染色后通过荧光显微镜观察该融合蛋白的表达及定位。结果重组质粒经鉴定证明构建正确。转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要分布在细胞质中。结论成功构建带HA标签的TTR真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为深入研究TTR在细胞内的相关生物学功能奠定了基础。
- 胡水旺孙明晶夏高晓陈丽赵明哲姜勇
- 关键词：前白蛋白基因表达
- 植烷酸氧化酶真核表达载体的构建及其细胞内定位
- 2010年
- 目的构建小鼠植烷酸氧化酶(Phyh)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Phyh编码序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH3T3细胞;使用细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA-Phyh在NIH3T3细胞中的表达及蛋白定位进行分析。结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-Phyh真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论成功构建了带HA标签的小鼠Phyh真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究Phyh的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。
- 孙明晶胡水旺夏高晓姜勇
- 关键词：蛋白定位
- 小鼠固醇载体蛋白2原核表达载体的构建与表达纯化
- 2010年
- 目的构建小鼠固醇载体蛋白2(SCP-2)融合蛋白表达载体,并在原核细胞内表达及纯化获得具有活性的融合蛋白,为进一步研究SCP-2的生物学功能提供基础。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到鼠SCP-2编码序列,然后将该编码序列克隆到带有His标记的载体pET14b上,重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,用镍离子亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性,然后切取分子量正确的条带用SDS-PAGE及质谱技术进行鉴定。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确。融合蛋白表达纯化后获得了分子量约59kD的融合蛋白,符合预期大小,并经质谱分析证明该融合蛋白的表达正确。结论成功构建了带His标签的SCP-2原核表达载体,并成功表达及纯化出该融合蛋白,为深入研究SCP-2的相关生物学功能提供了一个重要的工具。
- 胡水旺孙明晶夏高晓邓鹏姜勇
- 关键词：基因表达
- 固醇携带蛋白2（SCP2）和植烷酸氧化酶（Phyh）相互作用的鉴定
- 生物体内生命携带的遗传信息由不同的基因经转录、翻译传递到相应的蛋白质上并使其具有各自的生化特性及生物学活性;但每个蛋白质并不是独立地在细胞中完成被赋予的功能,它们在细胞中通常与其他蛋白质相互作用形成大的复合体,在特定的时...
- 孙明晶
- 关键词：蛋白质相互作用
- 文献传递
