张奇文
- 作品数：15 被引量：41H指数：5
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 单增李斯特菌srtA基因缺失株的构建及srtA基因对其毒力的影响研究被引量：5
- 2019年
- 为了研究srtA 基因对单增李斯特菌LM90SB2毒力的影响,本研究利用同源重组技术构建了LM90SB2 srtA 基因缺失株LM90SB2-ΔsrtA,比较分析了亲本株LM90SB2与缺失株LM90SB2-ΔsrtA对MBMEC、HBMEC、RAW264.7、SIEC 4种细胞系的粘附、侵袭、胞内增值能力及LM90SB2和LM90SB2-ΔsrtA 感染小鼠后,小鼠的LD50及肝脏、脾脏、脑载菌量变化差异。结果显示,本研究成功构建了srtA 基因缺失株;与亲本株LM90SB2比较,缺失株LM90SB2-ΔsrtA 对RAW264.7和SIEC的粘附率、侵袭率及胞内细菌数量均下降,且差异具有显著统计学意义(p <0.05);小鼠 LD50降低了21.38倍,肝脏、脾脏载菌量降低,差异具有显著统计学意义(p <0.05)。本研究结果表明,srtA 基因对单增李斯特菌LM90SB2的毒力具有关键作用,参与粘附、侵袭BMEC,该研究结果为进一步阐明单增李斯特菌毒力因子的致病机制提供理论依据。
- 张奇文凌晨吴学林马勋薄新文
- 关键词：单增李斯特菌毒力粘附
- 食源性单增李斯特菌的分离鉴定及药物敏感试验被引量：2
- 2018年
- 为了了解常规送检食物中单增李斯特菌的污染现况和分离株的药物敏感性,对2014年新疆生产建设兵团8个师常规送检的727份食品应用国标法进行细菌分离鉴定,采用Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法进行药物敏感试验。结果显示,从727份食品样品中分离出24株细菌,经革兰染色,培养特性和生化特性鉴定为单增李斯特菌。食品单增李斯特菌总检出率为3.3%,其中调理肉制品检出率最高,达17.77%,其次是冷冻鱼糜制品,检出率为4.95%。药敏试验表明, 24株单增李斯特菌对青霉素和环丙沙星耐药;大部分菌株对亚胺培南、强力霉素、万古霉素和庆大霉素敏感。表明送检食品不同程度受到单增李斯特菌的污染,食源性分离菌株出现多重耐药现象,提示食品安全不容忽视。
- 李红欢陈朔康立超马勋钱凌霄张奇文杜冬冬
- 关键词：药物敏感
- 单增李斯特菌lmo0331基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：6
- 2018年
- 试验旨在对单增李斯特菌临床分离株(LM90SB2)的LPXTG基序表面蛋白lmo0331基因进行克隆、序列分析和原核表达。根据GenBank中lmo0331基因序列设计特异性引物,利用PCR方法扩增LM90SB2 lmo0331基因,将扩增产物克隆到pMD19-T载体,测序后进行核苷酸序列和蛋白结构域分析;构建表达质粒pET32a-0331,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,利用SDS-PAGE和Western blotting检测重组蛋白。结果显示,LM90SB2 lmo0331基因核苷酸序列与NTSN株、F2365株、LL195株及WSLC 1033株的同源性均为100.0%,与N2306株、02-1792株、H34株的同源性均为99.9%。LM90SB2 lmo0331基因全长1 956bp,ORF全长为1 857bp,共编码618个氨基酸;蛋白结构域预测结果显示,lmo0331蛋白具有NEL、LRR、IR、PulA、LPXTG结构域。SDS-PAGE结果可见约88ku重组蛋白带,Western blotting表明该蛋白可与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合。本研究成功构建了原核表达载体pET32a-0331,实现了lmo0331融合蛋白的表达,为进一步研究lmo0331基因的功能及单克隆抗体的制备奠定了基础。
- 杜冬冬张奇文李红欢钱凌霄马勋
- 关键词：单增李斯特菌结构域原核表达
- 大肠杆菌K1侵袭血脑屏障的研究进展被引量：5
- 2017年
- 大肠杆菌K1株是引起新生儿败血症和脑膜炎的代表菌株,经血液循环进入大脑而致病。大肠杆菌K1黏附、侵袭脑微血管内皮细胞(BMECs)并穿越血脑屏障(BBB)的分子机制一直是众多学者研究探讨的热点。文章重点阐述致脑膜炎大肠杆菌K1穿越BBB的基因调控和信号介导通路,旨在了解致脑膜炎大肠杆菌感染的分子机理,为预防和治疗脑膜炎提供参考。
- 凌晨张奇文宋康蒋建军剡根强
- 关键词：大肠杆菌脑膜炎人脑微血管内皮细胞血脑屏障
- LPXTG基序蛋白lmo0160基因缺失对单增李斯特菌生物膜形成的影响
- 2017年
- 为了研究致绵羊脑炎单增李斯特菌新疆分离株LM90SB2的LPXTG基序蛋白lmo0160基因对生物膜形成能力的影响,本研究利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)及同源重组技术,使用穿梭质粒p KSV7载体,构建lmo0160基因缺失株LM90SB2-lmo0160。通过测定OD_(600)绘制生长曲线,利用结晶紫染色测定OD_(570)定量检测生物膜形成能力,在显微镜下观察生物膜的形态。结果显示:与LM90SB2菌株相比,LM90SB2-Δlmo0160在37℃培养条件下生长速度显著降低(P<0.01)。LM90SB2和LM90SB2-Δlmo0160在不同时间点均形成网格结构的生物膜,但生物膜的致密度和OD_(570)有不同。显微镜下LM90SB2-Δlmo0160形成松散,稀薄的生物膜,LM90SB2生物膜致密,浓厚。不同时间点LM90SB2-Δlmo0160 OD_(570)值均小于LM90SB2,8和12 h差异不显著(P>0.05);24 h差异显著,(P24 h<0.05);48 h差异极显著(P48 h<0.001)。本研究表明,Δlmo0160基因对LM90SB2生长增殖和生物膜形成具有一定的影响作用,这为进一步阐明LM毒力因子的致病机制提供理论依据。
- 张奇文凌晨马勋薄新文杜冬冬钱凌霄李红欢
- 关键词：单增李斯特菌同源重组生物膜
- 食源性单增李斯特菌毒力岛基因检测与致病性被引量：9
- 2019年
- 为了解食源性单增李斯特菌分离株的毒力岛1(LIPI-1)和毒力岛2(LIPI-2)的基因及致病性.利用PCR方法对8株分离株LIPI-1和LIPI-2进行基因检测,小鼠腹腔接种分离株菌悬液5×10^7CFU/只,进行致病性的初步试验.结果显示,LIPI-1的6个毒力基因除actA基因检出率为50.0%外,hly、prfA、plcA、plcB、mpl的检出率为100.0%;LIPI-2中inlA、inlB、inlC基因检出率为100.0%,inlD和inlE基因检出率分别为87.5%和75.0%,inlF和inlG毒力因子基因的检出率较低,分别为50.0%和37.5%.小鼠致病性试验显示,8株分离株均能致死小鼠,致死率在50.0%~100.0%.其中,LM5567和LM5570在5d内全部死亡,致死率为100.0%,表明这2株菌对小鼠有强致病力.说明LIPI-1基因检出率高于LIPI-2的基因检出率;菌株的致病性与毒力岛基因的携带率无明显相关,但分离株对小鼠均有致病性,提示食品安全不容忽视.本研究为食源性单增李斯特菌毒力岛基因携带率与致病力的关系提供铺垫.
- 李红欢陈朔康立超钱凌霄张奇文杜冬冬马勋
- 食源性单增李斯特菌14种潜在毒力基因的检测被引量：4
- 2018年
- 目的了解新疆生产建设兵团食源性单核细胞增生性增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)潜在毒力基因分布情况。方法以54株食源性LM DNA为模板,针对14个潜在毒力基因设计特异性引物并利用PCR技术检测潜在毒力基因。结果 54株分离株均携带潜在毒力基因,其中5563分离株携带率最高,为57.14%(8/14),21L662分离株携带率最低,为21.43%(3/14),其余分离株携带率在28.57%(4/14)~50%(7/14)之间。潜在毒力基因检出率不同,其中寡肽转运蛋白、内化素样蛋白、细胞壁表面锚定家族蛋白、单价阳离子/H+逆向转运蛋白、肽聚糖结合蛋白、组氨酸代谢系统、合成致死KAR3样蛋白、精氨酸/鸟氨酸逆向转运蛋白、ABC转运蛋白、Ⅱ型限制酶修饰系统Sau3Al,磷酸葡萄糖转移酶系统基因的检出率分别是98.15%、81.48%、77.78%、64.81%、59.26%、53.70%、51.85%、35.19%、12.96%、9.26%、9.26%,芳香族氨基酸合成因子,EsaC蛋白类似物,差向异构酶/脱水酶家族蛋白和转录调控因子3种潜在毒力基因未检出。结论检测食品源LM分离株14种潜在毒力基因的分布,为研究LM致病性和食品LM的溯源奠定了基础。
- 钱凌霄康立超李红欢张奇文杜冬冬马勋
- 关键词：PCR携带率检出率
- 单增李斯特菌新疆分离株Lmo0160基因的特征分析
- [目的 ]分析李斯特菌病绵羊脑分离株1mo0160 基因序列及其编码蛋白生物信息学特征.[方法]以李氏杆菌病死亡绵羊脑组织分离株LM90SB2 为材料，根据GenBank 中公布的1mo0160 基因序列设计特异性引物，...
- 张奇文马勋
- 单增李斯特菌新疆分离株lmo2192基因克隆及生物信息学分析被引量：2
- 2018年
- 试验旨在对单增李斯特菌新疆绵羊脑炎临床分离株LM90SB2的lmo2192基因进行克隆及生物信息学分析。根据GenBank中lmo2192基因序列(登录号:CAD00270)设计特异性引物,利用PCR方法对lmo2192基因进行扩增,回收目的基因,连接到pMD19-T载体上进行克隆,筛选阳性菌进行测序,测序后对lmo2192基因核苷酸序列进行分析,预测其编码蛋白质的二级结构、三级结构,对其进行同源性比对及遗传变异分析。结果显示,新疆分离株LM90SB2的lmo2192基因序列全长为1 277bp,包含969bp开放阅读框,共编码322个氨基酸;LM90SB2株lmo2192基因核苷酸序列与CIIMS-PH-1同源性为100.0%,与81-0861、10-0809、81-0592、81-0558、NTSN、F2365和WSLC1033的同源性为99.8%～99.9%,与L2074和NH1同源性分别为97.0%和96.9%。推导的氨基酸序列同源性为91.6%～100.0%。系统进化树显示,LM90SB2菌株lmo2192基因与4b血清型菌株亲缘关系较近,聚为同一分支。蛋白质二级结构预测表明,LM90SB2lmo2192蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,不形成跨膜结构。蛋白结构域预测,lmo2192蛋白为ATP酶组分。本试验成功克隆LM90SB2分离株lmo2192基因,为进一步研究其基因功能提供理论依据。
- 李红欢钱凌霄杜冬冬张奇文李庆辉马勋
- 关键词：单增李斯特菌克隆生物信息学分析
- 单增李斯特菌新疆分离株lmo0160基因克隆及序列分析被引量：5
- 2017年
- 【目的】单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,常引起人和动物致病。其细胞壁表面LPXTG基序蛋白在单增李斯特菌致病过程中发挥重要作用,根据参考株全序列预测的41个LPXTG基序蛋白中仍有部分蛋白功能未知。对单增李斯特菌新疆绵羊脑分离株LM90SB2的LPXTG基序蛋白Lmo0160的基因进行克隆及生物信息学分析,为功能验证提供基础。【方法】根据GenBank中收录的lmo0160序列设计特异性引物,利用PCR方法对新疆分离株的lmo0160基因进行扩增,将扩增产物克隆到pMD 19-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定,并对基因核苷酸序列和蛋白序列进行分析。【结果】分离株LM90SB2的lmo0160序列全长为1 708 bp,包含1 428 bp的开放阅读框,共编码475个氨基酸;LM90SB2株lmo0160核苷酸序列与CFSAN008100株(4b型,美国)、CFSAN023463株(4b型,美国)、J2-064株(4b型,美国)、F2365株(4b型,奶酪,美国)和NTSN株(4b型,绵羊脑,中国扬州)相似性为99.0%-99.1%;与M7株(4a型,牛奶,中国浙江)相似性为97.2%,与Finland1998株(1/2a型,美国)、N53-1株(1/2a型,熟火腿,瑞士)、N1546株(1/2a型,鱼,丹麦)和EGD-e株(1/2a型,美国)相似性为87.2%-91.1%;其推导的氨基酸序列与上述菌株相似性为91.8%-99.4%。系统进化树显示,LM90SB2菌株的lmo0160基因与CFSAN023463、F2365和NSTN菌株亲缘关系较近,处于同一分支上,而与标准株EGD-e菌株亲缘关系较远。蛋白质二级结构预测表明,LM90SB2的Lmo0160蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,不形成跨膜结构。蛋白结构域预测表明Lmo0160蛋白含有胶原蛋白结合域和Cna B结构域。【结论】克隆了LM90SB2的lmo0160基因,为进一步研究LM90SB2的lmo0160基因功能奠定了基础。
- 张奇文凌晨马勋杜冬冬钱凌霄李红欢
- 关键词：单增李斯特菌克隆生物信息学分析
