周伟
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：江苏省血吸虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫磷酸丙糖异构酶原核表达及免疫保护的初步研究被引量：4
- 2017年
- 目的克隆刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶(Triosephosphate isomerase,TPI)基因,原核表达和纯化蛋白,研究其对弓形虫感染小鼠的免疫保护作用。方法抽提弓形虫速殖子总RNA,利用PCR技术扩增刚地弓形虫TPI基因,构建重组原核表达载体TPI/p ET-28a(+),转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,镍亲和层析法纯化目的蛋白。将与佐剂乳化后的TPI蛋白对小鼠颈背部多点皮内免疫,间隔2周,连续免疫4次,最后一次为加强免疫,同时设置佐剂对照组与正常对照组。尾静脉采血检测小鼠血清抗体效价。以400个弓形虫速殖子/只接种小鼠腹腔,观察记录各组小鼠的生存率。结果成功扩增到弓形虫TPI基因,构建原核表达载体TPI/p ET-28a(+),获得纯化的TPI蛋白,TPI免疫4次后的小鼠血清抗体效价可达1:100 000以上,且生存期显著高于佐剂对照组与正常对照组。结论弓形虫TPI蛋白对弓形虫感染小鼠具有一定的免疫保护作用,为研究弓形虫疫苗奠定了理论基础。
- 沈双殷旭仁宋丽君王玠柯雪丹周伟余传信
- 关键词：刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶原核表达免疫保护
- Rho GTPases在感染与炎症中的免疫调节作用被引量：2
- 2017年
- Rho GTPases亚家族是属于Ras超家族的一类核苷酸依赖型小GTP结合蛋白,即小G蛋白(Small GTPases)。它们在细胞信号转导过程中发挥着"分子开关"的作用,控制着众多信号转导途径。在细胞信号转导过程中,Rho GTPases主要作用于细胞骨架或靶蛋白,从而调节多种生物学效应,如细胞膜运输和细胞迁移、黏附、增殖等。此外,Rho GTPases在机体感染与炎症中亦扮演着非常重要的角色。Rho蛋白广泛分布于T细胞、B细胞和NK细胞等免疫细胞中,当机体受到外来微生物、寄生虫等攻击后,Rho蛋白会通过一系列信号转导机制来激活机体的免疫炎症反应,Rho GTPases信号转导通路就是其中的一个非常重要的信号通路。本文主要就Rho GTPases通过其信号通路调控机体免疫反应而最终影响机体免疫应答作一综述。
- 周伟杨俊齐
- 关键词：RHOGTPASE炎症免疫调节
- 重组刚地弓形虫微线料体蛋白MIC10的制备与特性分析被引量：2
- 2018年
- 目的制备重组刚地弓形虫微线体蛋白10(MIC10),并对其免疫学特性进行分析。方法利用逆转录PCR(RT-PCR)技术从弓形虫总RNA中反转录制备第一链cDNA,再利用特异性引物从cDNA中扩增出编码MIC10的基因片段,构建重组表达质粒pET28a-MIC10,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)后用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,通过镍螯合亲和层析法纯化重组MIC10蛋白。用纯化的重组蛋白免疫家兔,制备抗MIC10多克隆抗体,采用Western blot分析重组MIC10蛋白的免疫学特性。结果采用RT-PCR法从弓形虫cDNA中反转录扩增到长度约为416bp的特异性DNA,基因序列分析证实为编码MIC10的基因片段;制备的重组表达质粒pET28a-MIC10转化大肠埃希菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,能表达重组MIC10蛋白;用纯化的重组MIC10蛋白免疫家兔,血清抗体效价达到1∶200 000以上。Western blot分析显示该抗体能识别弓形虫排泄分泌抗原中的天然MIC10分子而不识别弓形虫成虫抗原,证明MIC10为外分泌蛋白。结论制备了具有天然免疫原性的重组弓形虫MIC10蛋白,并证明该蛋白为外分泌蛋白。
- 周伟宋丽君沈双殷旭仁许永良刘茜余传信
- 关键词：刚地弓形虫免疫原性免疫诊断
- 日本血吸虫烯醇化酶的表达与诊断价值研究被引量：4
- 2016年
- 目的制备可溶性表达的日本血吸虫烯醇化酶,观察其免疫学特性及免疫诊断价值。方法采作RT-PCR方法反转录合成编码日本血吸虫烯醇化酶的cDNA片段,亚克隆到表达质粒pET28a(+)中构建重组表达质粒。将重组表达质粒转化到大肠埃希菌BL21中,在不同条件下诱导表达可溶性重组烯醇化酶(rSj Enolase),采用镍亲和层析法纯化rSj Enolase。以rSj Enolase免疫小鼠,制备抗血清,采用Western blot法分析rSj Enolase的免疫反应性与特异性。以rSj Enolase为抗原,建立检测抗Sj Enolase抗体IgG的ELISA方法,并以此方法对血吸虫病患者、其他寄生虫病患者及健康人血清进行检测,观察检测抗Sj Enolase抗体IgG用于血吸虫病诊断的敏感性与特异性;对治疗前及治疗后不同时间点的同一患者配对血清进行检测,观察治疗前、后患者血清中抗Sj Enolase抗体IgG水平的动态变化,并观察该方法的疗效考核价值。结果成功克隆编码Sj Enolase基因,并在18℃低温条件下成功表达可溶性rSj Enolase蛋白,采用镍亲和层析进行纯化rSj Enolase蛋白免疫小鼠获得效价大于1︰100 000的抗血清。Western blot显示rSj Enolase蛋白可被血吸虫病患者血清识别,而不与健康人血清反应;抗rSj Enolase鼠血清能识别血吸虫成虫抗原(AWA)和排泄分泌物(ESA)中的天然Sj Enolase分子。rSj Enolase不被曼氏裂头蚴病患者血清,华支睾吸虫病患者及卫氏并殖吸虫病患者血清识别,ELISA显示以rSj Enolase为抗原检测血吸虫感染者血清中的抗Sj Enolase特异性抗体的敏感性为93.71%,特异性为97.92%,与华支睾吸虫患者血清的交叉反应率为8.5%,与弓形虫病患者血清的交叉反应率为0。治疗后3个月的血吸虫病患者血清抗Sj Enolase抗体IgG水平迅速下降,阴转率达58.92%。结论可溶性重组Sj Enolase表达成功。该蛋白具有较高的抗原特异性,以此为抗原检测抗Sj Enolase抗体IgG具有血吸虫病诊断价值。
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- 关键词：烯醇化酶
- 日本血吸虫虫卵排泄分泌物中具有诊断价值的抗原分子的初步鉴定被引量：1
- 2020年
- 目的鉴定日本血吸虫虫卵分泌排泄物(ESA)中有血吸虫病诊断价值蛋白分子,为建立新的高敏感性和特异性的日本血吸虫病诊断方法奠定基础。方法日本血吸虫尾蚴感染家兔后42d,解剖家兔,取肝脏,匀浆后收集虫卵,置于PBS中,4℃过夜,收集上清,制备虫卵排泄分泌物。以虫卵排泄分泌物包被酶标板,采用ELISA检测不同感染度、不同感染时间小鼠血清抗体滴度。同时以虫卵ESAELISA分别检测血吸虫病患者血清、健康人血清和弓形虫病患者血清,观察虫卵ESA用于血吸虫病诊断的敏感性和特异性及交叉反应性。通过一维电泳免疫印迹、二维电泳免疫印迹和飞行质谱分析,鉴定虫卵ESA中具有诊断潜能的蛋白分子。结果ELISA检测结果显示血吸虫感染小鼠血清中抗虫卵ESA抗体IgG水平随着感染时间的延长而升高,且与血吸虫感染度呈正相关,在感染早期即检出相应抗体。虫卵ESA检测血吸虫病患者血清的敏感性为97.2%,检测健康人血清的特异性为95.2%,与弓形虫病患者血清的交叉反应性为25.0%。一维电泳免疫印迹试验显示血吸虫感染兔血清可识别170×103、150×103、130×103、100×103、72×103、70×103、30×103ku左右的ESA蛋白;二维电泳免疫印迹试验显示血吸虫感染兔血清可识别8个蛋白斑点,质谱分析其中1个蛋白斑点为日本血吸虫主要的虫卵蛋白P40。结论日本血吸虫虫卵排泄分泌抗原具有一定的血吸虫病诊断与早期诊断价值,虫卵的主要蛋白P40可能是一个具有诊断潜能的抗原分子。
- 宋丽君殷旭仁王玠肖迪张建中高玒周伟许永良余传信
- 日本血吸虫皮肤期童虫排泄分泌抗原的诊断价值
- 2016年
- 目的探讨日本血吸虫童虫排泄分泌抗原对血吸虫感染的诊断价值。方法收集日本血吸虫尾蚴,机械转化制备皮肤期童虫。收集童虫培养上清液,制备童虫排泄分泌抗原。用不同数量的尾蚴感染小鼠,收集不同感染度、感染时间的小鼠血清,采用基于血吸虫童虫排泄分泌抗原的酶联免疫吸附法检测抗童虫排泄分泌抗原抗体IgG水平的动态变化,观察其早期诊断价值。以同样方法检测健康人血清,血吸虫病患者及其他寄生虫病患者血清,观察该方法的临床诊断价值。结果小鼠感染血吸虫后1周血清中抗童虫排泄分泌抗原IgG即开始出现,并随着感染时间的延长抗体水平不断上升,5、10、15和20条尾蚴感染组小鼠在感染后1周抗体阳性率分别为40%、40%、80%和20%。用童虫排泄分泌抗原ELISA检测血吸虫病患者、健康人和其他寄生虫病患者血清均阳性。结论以日本血吸虫皮肤期童虫排泄分泌抗原ELISA检测相应IgG抗体对血吸虫初次感染小鼠具有早期诊断价值,可用于对血吸虫感染风险环境监测预警哨鼠的检测,但该方法尚不能用于人感染血吸虫的实验诊断。
- 刘茜宋丽君张秋明殷旭仁沈双周伟许永良余传信
- 关键词：童虫哨鼠
