高金巍
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：第二军医大学附属长海医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会基础研究重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Smurf1基因靶向RNAi慢病毒载体的构建及转染
- 2011年
- 目的构建Smad泛素调节因子1(Smurf1)基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,观察其转染骨肉瘤U20S细胞后对Smurf1基因表达的抑制作用,为后续研究奠定基础。方法构建Smurf1基因过表达质粒,同时针对Smurf1基因序列设计合成4条RNAi片段并构建RNAi慢病毒载体。过表达质粒和RNAi质粒共转染293T细胞后应用Western印迹法进行外源筛靶,筛靶出成功的干扰质粒PSC2939。用慢病毒包装PSC2939后感染U20S细胞,进行内源验证,荧光定量PCR和Western印迹检测U20S细胞中Smurf1mRNA及蛋白的表达。结果经PCR及测序证实,Smurf1基因过表达载体及4种干扰载体均成功构建;Western印迹外源筛靶显示,PSC2939干扰载体能有效敲减目的基因的表达;慢病毒包装后的PSC2939干扰载体能有效抑制U20S细胞中Smurf1蛋白的表达,对Smurf1mRNA的抑制率达到60%以上。结论成功构建可供感染的Smurf1基因RNAi慢病毒载体,为进一步研究Smurf1基因在骨肉瘤细胞中的作用提供了有效的实验工具。
- 袁恒锋何崇儒高金巍徐卫东
- 关键词：RNA干扰骨肉瘤慢病毒属
- 铬离子对成骨细胞的毒性及对Tnfrsf17基因的影响被引量：2
- 2014年
- 目的观察Cr3+对成骨细胞SaO2的细胞毒性以及在Cr3+的作用下对成骨细胞Tnfrsf17基因的表达的影响。方法体外培养SaO2成骨细胞,MTT法检测细胞活力,ALP试剂盒检测成骨细胞碱性磷酸酶的分泌情况,Von Kossa试剂盒检测细胞钙结节形成。通过Rt-PCR及Western检测Cr3+对Tnfrsf17表达的影响。结果在Cr3+的刺激作用下,与对照组相比,成骨细胞在相应时间节点细胞活性和钙结节形成明显受限,ALP的分泌呈时间与剂量依赖性的降低。在Cr3+的刺激作用下,0.1、1.3和150 mg各干预组与对照组相比,Tnfrsf17的基因表达水平及蛋白表达水平在24、48和72 h后均有所下降。结论 Cr3+对成骨细胞有细胞毒性而且可以下调Tnfrsf17基因及其蛋白产物的表达。
- 高金巍李大河杨生生缪明永徐卫东
- 关键词：成骨细胞铬离子
- Smurf1调节因子在骨形态发生蛋白诱导骨生成中的作用被引量：3
- 2011年
- 骨形态发生蛋白(BMP)是明确具有诱导成骨作用的生长因子。其通过结合靶细胞表面受体,活化细胞内一系列Sm ad蛋白,经Sm ad蛋白介导,将信号转导至细胞核内,在一系列辅助因子的作用下,启动成骨基因的表达。细胞内源性Smurf1对这一整个过程起抑制作用。本文就Smurf1调节因子在骨形态发生蛋白诱导骨生成中的作用做一综述。
- 袁恒锋何崇儒高金巍徐卫东
- 关键词：骨形态发生蛋白质类SMAD蛋白质类
