王德慧
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 突触小泡膜蛋白VAMP-2的原核表达、纯化及活性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达。重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性。
- 罗森王琴房华丽王德慧李崭李涛王慧
- 关键词：底物原核表达
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EspA和EspB蛋白的重组表达及其免疫效果
- 2013年
- 目的:通过DNA重组技术表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7的EspA和EspB蛋白,并分析它们的免疫保护性。方法:采用PCR技术从EHEC O157∶H7基因组中扩增espA和espB基因,连接至pET-22b(+)载体上,转化至宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE测定其相对分子质量,免疫小鼠分析其免疫保护性。结果:重组espA和espB基因片段的测序结果与GenBank中的相应基因序列完全一致,一致性均为100%;得到了纯度为95%以上的重组EspA和EspB蛋白,免疫小鼠所得到的抗体效价均为106。结论:重组EspA和EspB蛋白获得了可溶性表达,表达的蛋白具有良好的免疫保护性,为进一步制备疫苗奠定了基础。
- 韩燃李涛王琴房华丽罗森郭峰李崭王德慧李文平王慧
- 关键词：重组蛋白免疫效果
- pilO基因对鲍曼不动杆菌运动能力的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:构建无标记的鲍曼不动杆菌pil O基因缺失突变株,通过表型鉴定pil O基因缺失对鲍曼不动杆菌运动能力的影响。方法:PCR扩增pil O基因上下游各1 kb同源臂,连接至p MO130-TelR自杀质粒,质粒转化大肠杆菌S17-1后再接合至鲍曼不动杆菌4294中;蔗糖诱导自杀质粒与基因组同源重组,以获得基因缺失突变株;蹭行实验观察pil O基因缺失对鲍曼不动杆菌运动能力的影响。结果:构建了pil O基因缺失鲍曼不动杆菌4294菌株突变株;缺失株与野生株生长曲线无明显差异,但蹭行能力显著下降。结论:pil O基因与细菌蹭行能力密切相关,提示其编码鲍曼不动杆菌Ⅳ型菌毛结构蛋白。
- 郭通刘雄王德慧李崭黄洁李涛王慧
- 关键词：鲍曼不动杆菌
- 融合蛋白及其在治疗艰难梭菌相关疾病中的应用
- 本发明公开了融合蛋白及其在治疗艰难梭菌相关疾病中的应用。本发明提供了一种组合物，由艰难梭菌A毒素C端受体结合区TcdA、艰难梭菌B毒素C端受体结合区TcdB、艰难梭菌芽孢抗原BclA3和艰难梭菌黏附分子CD0873组成。...
- 王慧刘坤李涛王德慧
- 融合蛋白及其在治疗艰难梭菌相关疾病中的应用
- 本发明公开了融合蛋白及其在治疗艰难梭菌相关疾病中的应用。本发明提供了一种组合物，由艰难梭菌A毒素C端受体结合区TcdA、艰难梭菌B毒素C端受体结合区TcdB、艰难梭菌芽孢抗原BclA3和艰难梭菌黏附分子CD0873组成。...
- 王慧刘坤李涛王德慧
- 文献传递
- 艰难梭菌鞭毛帽蛋白的功能研究
- 2014年
- 目的验证艰难梭菌鞭毛帽蛋白FliD的黏附细胞活性以推测其在艰难梭菌感染中的作用,并鉴定其抗原性以测试其应用于候选艰难梭菌疫苗组分的可能性。方法 PCR获取VPI 10463全长fliD基因,构建pET-22b-fliD原核表达质粒,转化至BL21（DE3）中,诱导表达,Ni2＋亲和层析纯化,进行N端测序验证。蛋白3次皮下免疫大耳白兔后间接ELISA法检测其血清特异IgG水平并鉴定抗原性。间接免疫荧光染色后流式细胞术检测黏附Vero细胞能力。结果 VPI10463的fliD基因钓取成功,与GenBank公布的其他9株艰难梭菌的fliD基因相似度在89%～100%。pET-22b-fliD表达质粒构建成功,表达蛋白大小为56 ku,N端测序序列为MSSIS,与预期一致。一步纯化得到的蛋白纯度为99%以上。ELISA检测3次免疫后效价达到105。用流式细胞术检测其可以黏附在Vero细胞表面。结论构建的pET-22bfliD表达质粒成功表达FliD,具有黏附细胞活性,在艰难梭菌感染过程中起黏附因子作用,其具有较高的抗原性可以作为预防艰难梭菌感染的候选抗原之一。
- 王德慧谭林林王琴陈芳红李涛王慧
- 关键词：艰难梭菌流式细胞
