张险峰
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- HIV-1 Nef蛋白最新功能及其增强病毒感染性分子机理的研究进展被引量：2
- 2018年
- Nef蛋白是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）及其他灵长类动物慢病毒编码的一种附属蛋白,在获得性免疫缺陷综合症（AIDS）疾病进程和病毒的复制过程中起着重要作用。抑制附属蛋白活性的策略可以改善传统抗逆转录病毒方案的疗效,因此深入理解这一附属蛋白的功能和其分子作用机制具有重要意义。Nef蛋白通过三个主要活性调节宿主细胞环境,增强病毒复制。下调细胞表面分子如CD4,MHC-Ⅰ,MHC-Ⅱ等的表达,使病毒逃逸宿主的免疫应答;通过调节T细胞的信号通路降低T细胞的活化,从而营造有利于病毒复制的环境;直接增强新生子代病毒粒子的感染性。这一功能的分子机制直到最近宿主限制性因子丝氨酸转运蛋白（SERINC5）的发现才得以明晰。本文总结了Nef的功能及其增强病毒感染性的最新研究进展,同时也归纳了SERINC5蛋白与Nef蛋白的相互作用的研究报道,为深入了解病毒复制机理,改善HIV-1防治方案提供新的理论线索。
- 时静张险峰郑永辉
- 关键词：NEF感染性
- 高级别生物安全实验室菌(毒)种管理的思考被引量：4
- 2020年
- 病原微生物菌(毒)种是保障国家社会安全,经济安全和生物安全的重要战略资源。随着我国高级别生物安全实验室的建设和发展,很多这些实验室引进,分离或保存有高致病性病原微生物的菌毒种。而相应的做好实验室内菌毒种的储藏和管理工作,也是各高级别生物安全实验室所要履行的重要职责,同时也是面临的重要问题。我国对于病原微生物菌(毒)种管理先后出台了法规标准、技术规范、指定工作细则和菌(毒)种保藏机构建设规划。而对于如何更规范的管理好实验室内的病原微生物菌(毒)种,仍然需要我们积极地探索。将从菌(毒)种保存方法、菌(毒)种管理原则、菌(毒)种管理过程中的风险评估以及国内高等级实验室菌(毒)种库设施设备简介及其未来展望四个方面进行阐述。
- 王传钧张晶张险峰何希君刘益民
- 关键词：生物安全高致病性
- HIV-1 Vpr蛋白通过阻止病毒囊膜蛋白Env被ERAD途径降解而增强病毒在髓样细胞的复制
- 研究背景:巨噬细胞和树突状细胞(DC)在抵抗病毒感染的宿主天然免疫中占有重要的位置。它们不仅是HIV-1所攻击的主要宿主细胞之一,而且可以把病毒向其他组织传播并维持病毒的稳定复制。Vpr蛋白是HIV-1和SIV都具有的病...
- 张险峰
- 关键词：VPRHIVENV
- 文献传递
- 基于CRISPR/Cas9技术构建犬IRGM4、IRGM5和IRGM6基因敲除的MDCK细胞系被引量：3
- 2017年
- 由干扰素诱导细胞产生的GTP蛋白酶M(IRGMs)在抵御病原微生物中发挥着核心作用。为建立IRGMs基因缺失的MDCK细胞系,本研究利用CRISPR/Cas9技术根据MDCK中IRGM4、IRGM5和IRGM6的基因序列设计并合成正链和负链引导RNA(gRNA)的靶DNA序列,以本实验室构建的含有单链引导RNA(sgRNA)骨架转录序列的通用质粒(p Gen-sgRNA)为模板,将U6启动子与合成的相关基因gRNA靶序列经PCR融合扩增,其产物再与sgRNA的骨架转录序列进行重叠延伸PCR扩增,并将扩增产物克隆于p GEM-T载体中,分别构建了具有靶向不同目的基因ORF的gRNA重组质粒。将这些重组质粒分别与pMJ920质粒共转染于MDCK细胞中,通过G418筛选和流式细胞仪分选,并以终点稀释法纯化培养筛选出的单细胞克隆株。经gRNA靶序列片段的测序鉴定,获得了目的基因敲除的MDCK细胞系,并分别命名为MDCK-IRGM4-、MDCK-IRGM5-和MDCKIRGM6-。通过western blot检测经γ干扰素诱导条件下的这3种IRGMs基因在敲除细胞系中相应的蛋白表达均为阴性。这3种MDCK细胞IRGMs敲除的细胞系的建立,为进一步研究IRGMs基因在抗细胞内病原微生物感染中的功能奠定了基础。
- 徐广军曹世诺郑君张险峰贾洪林郑永辉
- 关键词：MDCK
- HIV-1 Vpr蛋白通过阻止病毒囊膜蛋白Env被ERAD途径降解而增强病毒在髓样细胞的复制
- 研究背景：巨噬细胞和树突状细胞(DC)在抵抗病毒感染的宿主天然免疫中占有重要的位置.它们不仅是HIV-1所攻击的主要宿主细胞之一，而且可以把病毒向其他组织传播并维持病毒的稳定复制.Vpr蛋白是HIV-1和SIV都具有的病...
- 张险峰
- 关键词：VPRHIVENV
- 基于非洲猪瘟病毒E199L蛋白间接ELISA方法的建立被引量：6
- 2022年
- 为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)间接ELISA抗体的检测方法,本研究从ASFV Pig/HLJ/2018株基因组中经PCR扩增E199L基因序列,将其克隆至p ET-32a(+)原核表达载体进行表达并纯化,表达的蛋白经SDS-PAGE和western blot鉴定后,用纯化的重组E199L蛋白(rE199L)作为包被抗原,利用矩阵法优化各反应条件,建立了检测ASFV E199L蛋白抗体的间接ELISA方法,并检测了该方法的特异性、敏感性和重复性。利用该方法及进口商品化试剂盒对196份猪临床血清样品进行检测,计算二者的符合率。SDS-PAGE及western blot结果显示,正确表达并纯化了rE199L,且rE199L具有良好的反应原性。间接ELISA方法反应条件的优化结果为:rE199L最佳包被浓度为4μg/mL;最佳血清稀释度1:100,37℃作用45 min;5%脱脂乳37℃封闭60 min;兔抗猪HRP-IgG最佳稀释度为1:10000,37℃孵育60 min。建立的该方法除了对ASFV阳性猪血清检测结果为阳性外,对PRRSV、PEDV、CSFV、PCV、PPV和PRV阳性猪血清均为阴性结果;敏感性试验结果显示,该方法可检测阳性血清的最大倍数为1:1600;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%。196份临床猪血清样品的检测结果显示,该间接ELISA方法的阳性检出率为89.3%(175/196),阴性样品检出率为10.7%(21/196);商品化试剂盒的阳性检出率为90.8%(178/196),阴性样品检出率为9.2%(18/196)。二者的符合率为98.3%。建立的该方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以满足临床检测和实验评价的需求,为ASFV抗体检测提供更多的方法选择。
- 范婷婷何希君张险峰
- 关键词：非洲猪瘟原核表达间接ELISA
