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利用电穿孔法对狂犬病病毒SRV9 Ψ区缺失株病毒的拯救及鉴定被引量：1: 2017年; 探讨电穿孔转染法对SRV9Ψ区缺失株重组病毒的拯救及鉴定。利用电穿孔细胞转染法,将纯化的Ψ区缺失株pcDNA-NPMG-L全长质粒和pcDNA-N、pcDNA-P、pcDNA-M、pcDNA-G和pcDNA-L辅助表达质粒共转染至BHK-21细胞中,并进行盲传,借助RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western-blot及透射电子显微镜对重组病毒进行鉴定。结果显示,重组病毒能够产生绿色荧光,透射电子显微镜观察可见典型的弹状病毒,对重组毒株与亲本毒株G蛋白进行Western-blot验证,可获得相应目的条带。结果表明,通过电穿孔细胞转染法,能成功拯救出重组病毒SRV9Ψ区缺失株,为病毒的拯救提供新的转染方法,并能有效提高转染效率,为研发新型狂犬病疫苗提供参考。; 毛丽萍魏玉圆王伟翟少华程瑶文兆海简子健; 关键词：狂犬病病毒拯救

利用Gibson Assembly法构建狂犬病SRV9突变株全长基因组cDNA的克隆: <正>研究目的狂犬病病毒(Rabies virus,RV)共编码核蛋白(Nucleoprotein,N)、磷酸化蛋白(Phosphoprotein,P)、基质蛋白(Matrix protein gene,M)、糖蛋白(G...; 翟少华魏玉圆王伟毛丽萍程瑶文兆海简子健; 关键词：狂犬病病毒突变株; 文献传递

野生动物用狂犬病口服疫苗复合免疫佐剂与诱饵的筛选及其对免疫效果的影响被引量：1: 2017年; 本研究旨在筛选最佳的复合佐剂和口服疫苗诱饵组方,并将筛选出的复合佐剂口服免疫试验小鼠,检测免疫小鼠血清IgG和肠道IgA抗体效价。采用牛肉粉、鸡肉粉、鱼肉粉、奶粉、血粉为主要原料,以细菌脂多糖、氢氧化锌、枸杞多糖、甘露低聚糖为疫苗免疫佐剂,通过正交试验方法将复合免疫佐剂和口服疫苗诱饵与狂犬病SRV9病毒混匀后口服免疫试验小鼠,并对免疫动物血清IgG抗体效价进行检测。优化的复合佐剂组方是细菌脂多糖100μg、氢氧化锌0.8mg、枸杞多糖50mg、甘露低聚糖10mg,免疫小鼠血清IgG抗体含量为3.24mg/L,肠道IgA抗体含量为1.56ng/mL;在疫苗诱饵的投喂试验中,狼、狐狸、犬、猫对鱼肉味诱饵的采食率最高,其次是血味和奶味诱饵;诱饵与狂犬病SRV9病毒混匀后口服免疫小鼠28d后,血清IgG平均值为1.20U/L。本试验筛选出口服疫苗复合免疫佐剂,经筛选制备的鱼肉味诱饵具备高采食性,适合野生食肉类动物口服疫苗的制备。可增加狂犬病SRV9病毒的免疫效应,为进一步研发重组减毒狂犬病口服疫苗提供了必要的技术支撑。; 程瑶毛丽萍文兆海古丽麦拉.卡日简子健翟少华; 关键词：免疫效果

狂犬病减毒脂质体口服冻干活疫苗免疫效果检测被引量：3: 2018年; 将制备的狂犬病rSRV。减毒口服冻干脂质体活疫苗配合以自制的复合佐剂，免疫小鼠、犬、猫，根据ELISA抗体定量检测方法，对免疫后小鼠血清IgG、小鼠粪便IgA、犬和猫血清IgO、犬和猫唾液IgA的ELISA抗体水平进行检测，其检测结果与注射狂犬病疫苗免疫效果进行对比。结果显示，复合佐剂＋rSRV9病毒口服免疫后70d，小鼠血清抗狂犬病特异性IgG抗体水平为4214．00U／mL，小鼠粪便中SIgA抗体水平为137．00U／mL；复合佐剂＋rSRV9病毒口服免疫犬120d抗体水平最高，犬抗狂犬痛特异性IgG抗体水平为1420．00U／mL，唾液中SIgA抗体水平为1199．00U／mL；猫抗狂犬病特异性IgG抗体水平为2088．00U／mL，唾液中SIgA抗体水平为1896．00u／mL。狂犬病疫苗口服组与注射组特异性抗体水平差异均不显著。结果表明，狂犬病rSRV9减毒口服冻干脂质体活疫苗的抗体产生水平已接近注射狂犬病疫苗的免疫效果，能够达到对动物的免疫效果。; 翟少华程瑶文兆海毛丽萍简子健; 关键词：免疫效果

一例犬外周神经鞘瘤的诊断: 2018年; 为了对一例患犬腕部肿物进行诊断,通过病史调查、触诊、直接数字化X射线摄影系统(DR)、血常规、生化指标等一系列检查后,临床上诊断为肿瘤,对肿瘤组织采样,经40g/L的甲醛固定后送新疆农业大学动物医学院病理诊断实验室检查。眼观,该肿物呈结节状,表面不平整,外有包膜包裹,大小为4cm×3.7cm×2.1cm。显微镜下观察,肿瘤组织呈现两种形态(Antoni A型和Antoni B型),为神经鞘细胞的增生,未见核分裂象。Antoni A肿瘤细胞型以纺锤形细胞增生为主,排列紧密,可呈束状、波浪状、栅栏状排列。Antoni B型的肿瘤细胞较少,呈纺锤形,排列稀疏,间质发生黏液样变性。经病理组织学观察,确诊为神经鞘瘤,且为混合型。; 文兆海闫书平胡远毛丽萍程瑶陈凯云翟少华简子健; 关键词：神经鞘瘤病理组织学肿瘤细胞

犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救与鉴定: 2018年; 探究犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救及鉴定,为后期犬瘟热-狂犬病二联口服弱毒活疫苗的研制奠定基础。采用脂质体转染的方法,将纯化后的重组质粒(pcDNA-N-G-EGFP-CDVN-PM-L)与辅助性表达质粒(pcDNAN、pcDNA-G、pcDNA-P、pcDNA-L)共转染BSR细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光技术进行检测并鉴定。结果显示,对盲传至第6代、第9代病毒液进行RT-PCR检测,均出现与预期相符的目的片段(狂犬病病毒N基因片段大小为1 315bp,犬瘟热病毒CDV-N基因片段大小为1 653bp)。间接免疫荧光试验后在激光共聚焦显微镜下,试验组均可观察到大量绿色荧光表达。RT-PCR结果与间接免疫荧光试验结果相吻合,表明犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒拯救成功。; 文兆海毛丽萍胡远程瑶周海莹陈凯云翟少华简子健; 关键词：反向遗传学 RT-PCR 间接免疫荧光

基因重排减毒狂犬病病毒的拯救及遗传稳定性的研究被引量：1: 2018年; 通过探究基因重排减毒狂犬病病毒的拯救及其遗传稳定性,为后期制备狂犬病口服弱毒活疫苗奠定基础。利用反向遗传学技术,采用脂质体转染的方法,将纯化后的全长重组质粒与4个辅助性表达质粒共转染BSR细胞;通过RT-PCR技术、间接免疫荧光试验对重组病毒进行鉴定及遗传稳定性分析。结果显示,第6~15代病毒液均可扩增出狂犬病病毒N基因、G基因、PM基因、L基因,与预期结果相符;激光共聚焦显微镜观察发现,试验组出现了大量的荧光灶点,空白对照组未见绿色荧光;间接免疫荧光鉴定结果与RT-PCR检测结果相符,证明基因重排狂犬病病毒拯救成功,且遗传稳定性良好。本试验结果表明,不仅可以将弱毒疫苗株Srv9的毒力进一步减弱,而且大大提高了其免疫原性,突破了制备新型狂犬病口服减毒疫苗的瓶颈。; 文兆海毛丽萍陈凯云周海滢胡远程瑶翟少华简子健; 关键词：狂犬病病毒拯救 RT-PCR 免疫荧光

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程瑶