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小鼠sox2基因的克隆及其原核表达载体构建被引量：1: 2010年; TAT穿膜肽能携带大分子物质进入细胞。NLS核定位信号肽是能帮助亲核蛋白进入细胞核的短肽。SoxB1家族的SOX2是维持ES细胞全能性的重要转录因子。通过RT-PCR方法从小鼠胚胎干细胞中克隆得到小鼠sox2基因,将其与穿膜肽基因tat和核定位信号基因nls融合,利用原核表达载体进行融合蛋白表达,并将表达的蛋白纯化、复性得到复性蛋白,为今后对SOX2蛋白的功能及生物学活性展开研究奠定了基础。; 王春红周秀梅刘辉黎江钱其军; 关键词：穿膜肽转录因子原核表达

人Oct4与细胞穿膜肽融合蛋白的表达: 2010年; 目的通过原核表达获得人Oct4(hOct4)与细胞穿膜肽融合蛋白,优化其表达方法并观察其穿膜效果。方法通过基因工程手段构建了pET原核表达载体,利用BL21(DE3)和Rosetta2(DE3)蛋白表达菌表达蛋白。Ni亲和纯化方法纯化蛋白,蛋白质印迹分析检测融合蛋白组成。将融合蛋白用罗丹明染色后加入人正常皮肤成纤维细胞株BJ观察其穿膜进入细胞情况。结果构建了pET21a(+)-hOct4-11R-His和pET21a(+)-EGFP-11R-His表达载体,转入大肠杆菌中后诱导获得了hOct4-11R-His和EGFP-11R-His融合蛋白,经蛋白质印迹分析检测表明融合蛋白正确。经BJ细胞测试,观察到融合蛋白进入细胞中。结论成功获得了hOct4-11R-His和EGFP-11R-His融合蛋白,且融合蛋白能够高效进入BJ细胞并聚集于细胞核周围。; 周承亮徐凤青王春红刘韬彭新荣钱其军; 关键词：重组融合蛋白质类

携带全长抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20载体构建与表达研究被引量：1: 2009年; 构建Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒载体并探索该腺病毒在体外表达全长抗体的能力。合成部核糖体进入位点(IRES)序列,将其与美罗华抗体重轻链连接,克隆到pDC338质粒载体上,并与以11b型腺病毒(Ad11b)Fiber替代5型腺病毒(Ad5)Fiber的嵌合型腺病毒骨架质粒pAd5F11b进行重组,获得Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒。将鉴定正确的病毒空斑感染293细胞,ELISA检测其表达水平以及间接免疫荧光检测该病毒表达抗体的特异性。结果表明,嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20在293细胞中的表达量高达3.78μg/ml±0.30μg/ml,间接免疫荧光(IFA)显示该病毒表达的抗体只与CD20+的Raji细胞有特异性结合,而与CD20-的Molt-4细胞无结合能力。成功构建了高效表达抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20。; 杨秋梅吴红平周秀梅李林芳王春红姜梨华钱其军; 关键词：抗CD20抗体 IRES

携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究被引量：1: 2010年; 目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒骨架质粒pPE3共转染大肠杆菌BJ5183,同源重组产生腺病毒重组质粒(pPE3-F11-RGD-4C),该重组质粒与PDC328-EF1-EGFP共转染人胚肾293细胞进行包装,产生重组腺病毒(AD11-RGD-4C-EG-FP)。用该重组腺病毒感染HepG2、BEL-7404以及BJ细胞,通过荧光显微镜观察感染效率。结果所构建的重组腺病毒PCR扩增出1 123 bp包含目的片段的基因片段。同时,制备了高滴度的重组病毒,纯化后病毒滴度为1.3×1010pfu/ml。当MOI=10,48 h时该重组病毒对HepG2、BEL-7404及BJ细胞的感染效率明显高于对照组腺病毒(AD11-EGFP)。结论成功构建了可提高腺病毒感染效率的嵌合型腺病毒(AD11-RGD-4C-EGFP),为进一步的研究奠定了基础。; 刘辉王春红陈亚龙李林芳吴红平钱炎珍姜梨华钱其军; 关键词：腺病毒载体肝细胞癌

氧依赖性降解结构域-RANTES融合基因腺病毒表达载体的构建及体外趋化活性观察: 2009年; 目的:构建携带活化T细胞表达和分泌调节因子(regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted,RANTES/CCL5)基因及氧依赖性降解结构域(oxygen-dependent degradation domain,ODD)融合基因的重组腺病毒,并观察其体外趋化活性。方法:PCR法将人RANTES基因与ODD融合,构建携带该融合基因的重组腺病毒SG511-CCL5-ODD;增殖实验观察重组腺病毒增殖特性,ELISA法观察常氧和缺氧条件下RANTES蛋白的表达;趋化试验观察重组腺病毒感染肝癌细胞后的趋化活性。结果:成功构建携带人RANTES-ODD融合基因的重组腺病毒SG511-CCL5-ODD;增殖实验表明重组腺病毒具有肿瘤选择性复制的特性;缺氧条件下重组病毒转染肝癌细胞后RANTES蛋白表达量均比常氧条件下高(P<0.05),显示ODD可有效调节RANTES蛋白表达;趋化试验表明重组腺病毒感染肝癌细胞具有趋化NK92细胞的作用。结论:重组腺病毒SG511-CCL5-ODD体外能有效感染肝癌细胞株HepG2和Hep3B,并在ODD调控下表达RANTES蛋白,有效发挥体外趋化NK92细胞的活性。; 黎江吴红平李林芳刘辉王春红金华君钱其军; 关键词：RANTES 腺病毒

昆虫杆状病毒表达egfp载体构建及鉴定被引量：1: 2011年; 用EcoR I和SalI将目的基因片段6His-11R-eGFP从载体pDC316-6His-11R-eGFP上酶切下来,并将该目的基因片段与供体载体pFastBac1连接构建供体质粒pFastBac1-6His-11R-eGFP;将其转化大肠杆菌(Esche-richia coli)DH10Bac感受态细胞,经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBac-6His-11R-eGFP,PCR鉴定得到单一目的基因条带。将该病毒载体转染Sf9细胞,进行病毒包装,在倒置荧光显微镜下观察蛋白表达,并以荧光定量PCR方法测定病毒滴度。; 赵清霞王春红钱其军; 关键词：EGFP 杆状病毒 SF9细胞

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王春红