王利
- 作品数：17 被引量：11H指数：2
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- DEHP对3β-羟类固醇脱氢酶表达水平的影响
- 目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对MCF-7细胞中3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)表达的影响。方法:体外培养MCF-7细胞,用DEHP处理MCF-7细胞,荧光定量PCR检测3β-HSD基因表达变化,...
- 王利彭鹏徐新云袁建辉龙鼎新
- 关键词：基因表达生殖毒性
- 文献传递
- 促进3β-HSD基因表达的表达载体及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种促进3β‑HSD基因表达的表达载体及其构建方法和应用。该表达载体包括慢病毒载体pLVX‑mCMV‑ZsGreen‑PGK‑Puro的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列以及目的基因表达片段。...
- 徐新云王利毛侃琅彭鹏
- 文献传递
- 3β-HSD基因沉默细胞株的建立及其对DEHP致凋亡的影响被引量：4
- 2019年
- 目的构建3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)基因shRNA慢病毒干扰载体,建立3β-HSD基因沉默细胞株,研究3β-HSD基因沉默对塑化剂邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(DEHP)致凋亡的影响。方法根据GenBank提供的3β-HSD基因mRNA序列,设计合成3条干扰序列,退火后连接到PLVX-shRNA2-puro中,将重组慢病毒载体转染293FT细胞,收集病毒上清,感染MCF-7细胞。利用嘌呤霉素筛选得到3β-HSD沉默细胞株,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Westernblot)对干扰效果进行鉴定。用不同剂量DEHP对MCF-7细胞和3β-HSD沉默细胞染毒24h,检测凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-8的基因和蛋白表达水平的变化。结果该实验插入慢病毒载体PLVX-shRNA2-puro中的3β-HSD基因干扰序列与设计的序列一致;3β-HSD沉默细胞中3β-HSD基因表达水平较对照组MCF-7细胞降低77%,3β-HSD蛋白表达水平较对照组MCF-7细胞降低74%。不同剂量DEHP染毒3β-HSD沉默细胞和MCF-7细胞后,qRT-PCR结果显示,MCF-7细胞中Bax基因表达水平较对照组(0mmol/LDEHP)升高28%~54%,Caspase-3基因表达水平升高13%~49%,Caspase-8基因表达升高21%~70%。与同染毒剂量组的MCF-7细胞比较,3β-HSD沉默细胞中Bax基因表达水平降低11%~28%,Caspase-3基因表达降低12%~23%,Caspase-8基因表达降低11%~34%。Westernblot结果显示,MCF-7细胞中BAX蛋白表达水平较对照组升高28%~61%,Caspase-3蛋白表达升高40%~48%,Caspase-8蛋白表达升高31%~84%。与同染毒剂量组的MCF-7细胞比较,3β-HSD沉默细胞Bax蛋白表达水平降低11%~27%,Caspase-3蛋白表达降低21%~40%,Caspase-8蛋白表达降低12%~25%。结论该研究成功构建了3β-HSD基因沉默细胞株。DEHP可引起细胞凋亡基因及蛋白表达升高,3β-HSD基因沉默能在一定程度上抑制DEHP对凋亡基因的活化。
- 王利秦逍云徐新云曾怀才郑凯王冰玉龙鼎新
- 关键词：基因沉默
- 3β-HSD基因高表达细胞株建立及其对DEHP致凋亡影响研究
- 目的 邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(di-(2-ethylhexyl) phthalate,DEHP)是常见的增塑剂之一,广泛分布于环境中,DEHP属于环境内分泌干扰物,具有明显的生殖毒性.本文应用分子克隆技术构建3β...
- 徐新云王利袁建辉黄海燕彭鹏
- 关键词：分子克隆基因高表达凋亡
- DEHP对3β-羟类固醇脱氢酶表达水平的影响被引量：2
- 2017年
- 目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对MCF-7细胞中3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)表达的影响。方法:采用不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L)DEHP对体外培养的MCF-7细胞分别染毒12、24和48 h,或同一浓度(0.8 mmol/L)染毒不同时间(3、6、12、24、48 h)后,荧光定量PCR检测各组MCF-7细胞3β-HSD m RNA表达水平,Western blot检测3β-HSD蛋白表达水平。结果:DEHP 0.1~0.8 mmol/L分别染毒细胞12~48 h,3β-HSD m RNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01);DEHP0.05 mmol/L染毒细胞48 h,3β-HSD m RNA表达水平比对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。DEHP 0.8 mmol/L染毒细胞6~48h,3β-HSD m RNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01)。DEHP 0.2~0.8 mmol/L染毒细胞24 h,3β-HSD蛋白表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:DEHP可引起3β-HSD m RNA和蛋白表达水平升高,推测DEHP可能通过影响类固醇激素合成过程中3β-HSD表达水平的变化,从而产生生殖毒性作用。
- 王利彭鹏徐新云袁建辉龙鼎新
- 关键词：基因表达生殖毒性
- MEHP对CHO细胞凋亡基因和癌基因表达水平的影响
- 2016年
- 目的探讨邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)的细胞毒性和对凋亡基因和癌基因表达水平的影响。方法采用4个不同剂量的MEHP对CHO细胞染毒24 h后,采用荧光定量PCR检测4个凋亡基因Bcl-2、caspase-3、caspase-9,Bax及癌基因p53表达水平的改变。结果 0.5 mmol/L MEHP染毒时caspase-3、caspase-9、Bax表达水平较对照组显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05);凋亡基因Bcl-2表达水平在4个剂量组均比对照组显著降低(P<0.05或P<0.01),在0.25与0.5 mmol/L MEHP作用下,Bax与Bcl-2比值显著降低(P<0.05或P<0.01),p53在0.25和0.5 mmol/L MEHP浓度下表达下降。结论 MEHP可通过激活线粒体caspase凋亡信号通路引起CHO细胞凋亡,同时可引起抑癌基因表达水平下降。
- 秦逍云徐新云谭琴彭鹏王利
- 关键词：塑化剂中国仓鼠卵巢细胞凋亡基因癌基因
- 3β-HSD基因高表达对DEHP致细胞氧化损伤和相关基因表达的影响
- 目的:研究DEHP对细胞的氧化损伤作用以及对相关基因表达水平的影响,探讨3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)在其中起的作用.
方法:分别采用浓度为0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mmol/L的DEH...
- 徐新云王利彭鹏
- 关键词：邻苯二甲酸酯细胞氧化损伤基因表达
- 3β-HSD基因高表达细胞株建立及其对DEHP致凋亡影响研究
- 目的:邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(DEHP)是常见的增塑剂之一,广泛分布于环境中,具有明显的生殖毒性。本文应用分子克隆技术构建3β-HSD高表达细胞株,研究3β-HSD高表达对DEHP致细胞凋亡的影响。方法:根据Ge...
- 徐新云王利袁建辉黄海燕彭鹏
- 关键词：分子克隆生殖毒性
- 文献传递
- 3β-HSD基因高表达细胞株建立及其对DEHP致凋亡影响研究
- [目的]邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)是常见的增塑剂之一,广泛分布于环境中,DEHP属于环境内分泌干扰物,具有明显的生殖毒性。本文应用分子克隆技术构建3β...
- 徐新云王利袁建辉黄海燕彭鹏黄新凤
- 关键词：生殖毒性凋亡
- 3β-HSD基因沉默或高表达对DEHP致细胞氧化损伤的影响被引量：1
- 2018年
- 目的研究邻苯二甲酸二-（2-乙基己）酯（DEHP）对MCF-7细胞的氧化损伤作用，探讨3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）基因沉默或高表达对DEHP致氧化损伤作用的影响。方法体外培养MCF-7细胞、3β-HSD基因沉默细胞、3β-HSD基因高表达细胞，DEHP对细胞染毒，以MCF-7细胞为对照，不同浓度DEHP（0.00、0.05、0.10、0.20、0.40、0.80 mmol/L）分别染毒24 h，测定3种细胞内氧化损伤指标丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的变化，荧光定量PCR检测DNA损伤修复基因hOGG1、hMTH1 mRNA表达变化，Western blot法检测hOGG1、hMTH1蛋白表达变化。结果DEHP染毒MCF-7细胞后，与对照组（DEHP 0 mmol/L）比较，MDA含量升高，SOD活力、GSH含量、GSH-PX活力降低，hOGG1、hMTH1 mRNA表达水平升高，hOGG1、hMTH1蛋白表达水平升高，差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。DEHP染毒3β-HSD沉默细胞后，与同染毒剂量组的MCF-7细胞比较，3β-HSD沉默细胞中MDA含量升高，SOD活力、GSH含量、GSH-PX活力降低，hOGG1、hMTH1 mRNA表达水平降低，hOGG1、hMTH1蛋白表达水平降低，差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。DEHP染毒3β-HSD高表达细胞后，与同染毒剂量组的MCF-7细胞比较，3β-HSD高表达细胞中MDA含量降低，SOD活力、GSH含量、GSH-PX活力升高，hOGG1、hMTH1 mRNA表达水平升高，hOGG1、hMTH1蛋白表达水平升高，差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论DEHP可引起MCF-7细胞发生氧化损伤，诱导相关基因及蛋白发生改变；3β-HSD基因沉默使DEHP致氧化损伤加重，3β-HSD基因高表达使DEHP致氧化损伤减轻，3β-HSD基因在DEHP致氧化损伤中具有重要作用。
- 王利柯跃斌徐新云袁建辉秦逍云龙鼎新
- 关键词：基因沉默
