付刚
- 作品数：38 被引量：11H指数：3
- 供职机构：中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金天津市科技支撑计划重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程农业科学轻工技术与工程更多>>
- 几丁质酶突变体的制备及其应用
- 本发明借助重组蛋白技术实现BcchiA1在枯草芽孢杆菌中的分泌型表达，显著降低菌株本底蛋白的干扰，简化下游蛋白纯化工艺，控制生产成本。同时，本发明涉及公开几株高酶活几丁质酶突变体，酶比活力较BcchiA1野生型提高了18...
- 张大伟李金龙王思佳付刚
- 文献传递
- 一株高产中性蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用
- 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌BAP-1及发酵生产的中性蛋白酶。该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BAP-1。本发明解淀粉芽孢杆菌(Bacillus a...
- 张大伟付刚宋亚凤
- 文献传递
- 一种提高α-淀粉酶表达量的通用型枯草芽胞杆菌整合表达载体
- 本发明公开了一种能够提高α-淀粉酶表达量的通用型枯草芽胞杆菌整合表达载体。本发明涉及一种通用型的枯草芽胞杆菌整合表达载体，包含如下元件：枯草芽孢杆菌的启动子序列、用于整合各种可能涉及表达调控相关元件的多克隆位点序列、大肠...
- 张大伟盖园明付刚
- 文献传递
- 一种包含麦芽糖启动子的载体以及麦芽糖启动子突变体
- 本发明公开了一种包含麦芽糖启动子的载体以及麦芽糖启动子突变体。本发明构建了一种在原核宿主中可表达的新型载体，以及包含枯草芽孢杆菌中麦芽糖操纵子的可诱导启动子的核酸序列及其突变体序列，其中所述载体和核酸序列可分别适用于转化...
- 张大伟付刚岳洁郑平
- 文献传递
- 一种来源于地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶高温突变体
- 本发明提供一种来源于地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶高温突变体，以来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)碱性蛋白酶基因subC为基础，通过定点突变PCR技术获得了2个碱性蛋白酶突变体subCMtemp...
- 张大伟付刚
- 文献传递
- 一株高产碱性蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用
- 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一株地衣芽孢杆菌BLP-1及发酵生产的碱性蛋白酶。该菌株为地衣芽孢杆菌(<I>Bacillus licheniformis</I>) BLP-1，本发明地衣芽孢杆菌(<I>Bacill...
- 张大伟付刚岳洁
- 文献传递
- 通过信号肽筛选优化耐高温α-淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的分泌被引量：4
- 2017年
- 以大肠-枯草穿梭载体p MA5质粒为基本骨架,以来源于嗜热脂肪地芽孢杆菌Geobacillus stearothermophilus NUB3621的耐高温α-淀粉酶基因为目标基因,利用POE-PCR法,成功构建针对淀粉酶的信号肽筛选载体。从枯草芽孢杆菌168基因组中扩增得到46个信号肽,利用POE-PCR法,使46个信号肽分别与线性化的筛选载体形成对应的multimer产物,直接转化枯草芽孢杆菌1A751,得到含不同信号肽的重组菌株。发酵结果显示,除了5个与淀粉酶适配性很低的信号肽,其它信号肽均有不同的引导淀粉酶细胞外分泌的能力,其中bgls引导淀粉酶细胞外分泌的能力最强,上清酶活的峰值达1 393.3 U/m L。
- 刘金岚付刚董会娜袁向华张大伟
- 关键词：耐高温淀粉酶信号肽枯草芽孢杆菌
- 肌酐酶在枯草芽孢杆菌中的异源表达及分泌机制被引量：1
- 2020年
- 肌酐酶是用于临床检测肾小球滤过功能的关键酶之一,但目前国内肌酐酶的生产量较低无法满足市场需求,多依赖于国外进口。为了解决这一问题,本研究将恶臭假单胞杆菌肌酐酶基因克隆至原核表达载体pMA5实现肌酐酶在枯草芽孢杆菌1A751中的异源表达。随后通过启动子优化,使肌酐酶的蛋白表达量显著提高到1.08mg/mL,并且胞外肌酐酶的比酶活力达到238U/mg。同时发现肌酐酶可不依赖于信号肽即可实现胞外分泌,因此对肌酐酶在枯草芽孢杆菌中的分泌机制进行研究。通过对经典分泌途径和Holin途径的分析排除、利用Calcein-AM/PI双染色法鉴定表达菌株1AGC的细胞膜不完整,最后通过电子显微镜观察结果表明表达菌株表面存在潜在的泄漏位点,因此证实肌酐酶在枯草芽孢杆菌中通过细胞泄漏的方式,释放到胞外培养基中。本文构建了一株基于细胞泄漏的肌酐酶高产菌株,为肌酐酶的表达和潜在工业化应用提供理论基础,同时也为枯草芽孢杆菌泄漏表达系统提供了一定的研究基础。
- 陶政宇付刚闻建平张大伟
- 关键词：枯草芽孢杆菌电子显微镜观察
- 麦芽糖转录激活因子MalR的突变体文库构建筛选及其应用
- 本发明提供了一种以芽孢杆菌为出发菌株，利用荧光蛋白快速构建筛选麦芽糖转录激活因子MalR突变库的方法，同时筛选获得可降低麦芽糖启动子渗漏表达并提高其诱导表达强度的启动子突变体，从而有利于麦芽糖启动子在蛋白表达中的应用。
- 张大伟付刚
- 文献传递
- 一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选
- 一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选。本发明借助重组蛋白技术实现BcchiA1在枯草芽孢杆菌中的高效分泌型表达，解决了大部分微生物几丁质酶分泌量不足的问题。同时，创建一种新的几丁质酶高通量筛选方法，极大地...
- 张大伟王思佳付刚
- 文献传递
