龙丹丹
- 作品数：19 被引量：48H指数：4
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- 鸭坦布苏病毒GZSS2022株分离鉴定及其全基因序列遗传进化分析
- 2024年
- 本研究从贵州省黔东南地区某麻鸭养殖场采集到疑似感染鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)病的组织病料,无菌处理后接种于鸡胚连续传代培养,分离到一株病毒,通过RT-PCR、PCR鉴定及透射电镜形态观察确定该分离病毒为DTMUV,命名为GZSS2022株。为了解该分离病毒的遗传变异特点,对该分离病毒进行动物回归实验、PCR扩增及测序其全基因组、在线BLAST比对其全基因组核苷酸同源性并绘制系统发育进化树后再进行遗传进化分析。结果显示:用该病毒感染SPF雏鸭后临床症状与病理剖检基本符合DTMUV感染特征,且在病理切片中可观察到鸭脑部血管渗出淋巴细胞和单核细胞聚集在血管周围形成“血管袖套”这一典型的DTMUV感染现象。GZSS2022株与NCBI上已上传的其他DTMUV参考毒株全基因组核苷酸同源性均在96%以上,其中与广西分离株GXQZ01-2020同源性最高为99.5%,且同属于中国谱系I群毒株,与多数分离于北方地区的中国谱系II群相比,具有明显流行地域性。本次所分离的DTMUV及其全基因组序列分析结果以期为坦布苏病毒地域性流行情况与该病毒遗传变异情况的研究提供参考。
- 安而立嵇辛勤阮涌阮涌曹伟王晗晗陈泽辉龙丹丹陈佳琪杨纯培龙丹丹王丽娟陈佳琪
- 关键词：全基因遗传进化
- H6N6亚型禽流感病毒感染鸭免疫器官中3种细胞因子的表达变化
- 2022年
- 为探讨鸭感染H6N6亚型禽流感病毒(AIV)后对免疫器官中细胞因子IL-2、IL-10和IFN-α转录水平的影响,建立荧光定量PCR方法对胸腺、脾脏、法氏囊中的IL-2、IL-10和IFN-α3种细胞因子检测,研究非免疫鸭感染H6N6亚型AIV后1、3、5 d各细胞因子在免疫器官中的变化。结果显示,建立的荧光定量PCR方法标准曲线相关系数R~2为0.996~1.000,扩增效率为92.2%~93.6%,相关性较好,熔解曲线整齐单一,变异系数均小于9%,可用于后续试验;鸭在感染H6N6亚型AIV后的一定时间内免疫器官中的IL-2、IL-10和IFN-α呈现不同程度的转录水平变化,以及不同的细胞因子在不同组织之间的转录水平差异较大,其中IL-2在法氏囊中的转录水平比在胸腺和脾脏中变化明显较大;而IFN-α在胸腺和脾脏中的转录水平高于法氏囊;IL-10在免疫器官中转录水平较低。还发现H6N6亚型AIV感染鸭后免疫器官中的IL-2、IL-10、IFN-α转录水平在一定时间内为先上升后下降趋势,并且在感染后5 d降到最低。表明感染H6N6亚型AIV对鸭免疫器官中IL-2、IL-10和IFN-α转录水平有一定的影响。
- 陈佳琪段志强阮涌龙丹丹嵇辛勤
- 关键词：禽流感病毒免疫器官细胞因子
- 犬乳腺肿瘤病理组织学观察及ER PR C-erbB-2的表达分析
- 2017年
- 通过对20例犬乳腺肿瘤进行病理组织学观察、免疫组织化学染色,探讨犬乳腺肿瘤病理形态学特点,ER、PR、Cerb B-2表达与乳腺肿瘤的关系。结果显示,20例犬乳腺肿瘤,70%为恶性肿瘤,其中良性肿瘤有导管内乳头状瘤和纤维性瘤,恶性肿瘤有浸润性导管癌,单纯癌,小叶原位癌,癌肉瘤,腺癌,恶性肿瘤发病率高于良性肿瘤。免疫组化结果显示-ER、PR在良性肿瘤的表达率均高于恶性肿瘤,P<0.05,差异显著;C-erb B-2在恶性肿瘤中的表达高于良性肿瘤,P<0.05,差异显著。提示,犬乳腺肿瘤恶性肿瘤发病率较高,ER、PR、C-erb B-2对犬乳腺肿瘤发病中的诊断、治疗及预后有重要意义。
- 刘廷江嵇辛勤主性阮涌王修江林聪宏陈强雷云龙丹丹胡焱万彪
- 关键词：乳腺肿瘤免疫组织化学
- 犬IFN-β的克隆及其序列分析被引量：2
- 2019年
- 为了分析犬干扰素β(IFN-β)基因分子特征,预测其编码蛋白质的生物学功能,根据GenBank登录的犬IFN-β基因序列(FJ194477)设计合成特异性引物,通过PCR从外周血淋巴细胞总DNA中扩增IFN-β基因CDS区并克隆,应用生物信息学方法对犬IFN-β基因进行序列分析,并对其理化性质以及编码蛋白的二级结构、三级结构进行预测,构建分子系统进化树。结果表明:犬IFN-β基因编码区全长561 bp,共编码186个氨基酸,其分子式可表示为C_(1014)H_(1593)N_(263)O_(290)S_9,分子质量为22.40 ku;属于亲水性蛋白,理论等电点为5.98;含有丰富的二级结构,以α-螺旋(76.88%)和无规则卷曲(19.35%)为主,蛋白三级结构呈弯曲螺旋结构;与貉、威德尔海豹、金钱豹、家猫、宽吻海豚、人、鸡和绿头鸭相对应序列核苷酸序列同源性分别为98.4%、87.2%、85.2%、84.7%、79.0%、74.9%、43.9%和43.3%。说明犬与貉IFN-β核苷酸同源性最高,亲缘关系最近。
- 黄梦秋嵇辛勤段志强李世静阮涌万彪胡焱邓珊珊龙丹丹田宇杰
- 关键词：干扰素-Β扩增克隆生物信息学
- 犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化被引量：8
- 2018年
- 为了研究犬细小病毒(canine parovirus,CPV)VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPVVP2基因插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件。最佳条件下的诱导产物经超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,重组质粒pET-VP2经双酶切鉴定分别获得大小为5 900bp左右的载体条带和1 755bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-VP2重组质粒;重组VP2蛋白的分子质量约为64ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0mmol/L IPTG、诱导5h条件下表达量最高,条带最亮;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,只在沉淀中出现了目的条带,而上清中并未出现相应条带,说明重组蛋白均以包涵体的形式存在;纯化后获得的重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在64ku处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-VP2。本试验通过对CPV VP2蛋白的原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的CPV VP2蛋白,为今后制备CPV VP2蛋白多克隆抗体及进一步研究该蛋白在对治疗犬细小病毒病中的临床应用价值提供了基础理论依据。
- 龙丹丹嵇辛勤段志强阮涌陈强雷云万彪胡焱
- 关键词：VP2基因原核表达
- 畜禽源3种革兰氏阴性杆菌多重PCR检测方法的建立与应用被引量：5
- 2016年
- 为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例中3种常见革兰氏阴性杆菌的多重PCR检测方法,本试验针对大肠埃希菌23SrRNA基因、巴氏杆菌KMT基因和沙门氏菌invA基因分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别大肠埃希菌、巴氏杆菌和沙门氏菌的多重PCR反应体系,并进行反应条件优化及方法性能评估。结果显示,所建立的方法最佳引物浓度分别为1.0、1.5和1.0μmol/L,最佳退火温度为56℃。性能评价结果显示,所建立的多重PCR检测方法具有较好的特异性和敏感性,其中对沙门氏菌检测敏感性最高,为1.44pg/μL。对70株革兰氏阴性临床分离细菌进行检测,结果表明,所建立的多重PCR检测方法能实现3种临床分离细菌的快速准确鉴定。本方法的建立为相关临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效的技术支持。
- 马光强刘丽娟龙丹丹岳筠李毅文明程振涛周碧君
- 关键词：多重PCR大肠埃希菌巴氏杆菌
- 遵义市宠物犬细小病毒感染情况调查
- 2018年
- 为了解遵义市宠物犬细小病毒的感染情况,对遵义市2家宠物医院2016年3月至2017年3月接诊的1 090个疑似犬细小病毒感染病例进行实验室胶体金快速检测诊断。结果:确诊犬细小病毒阳性232例,发病率为21.28%(232/1 090);犬年龄越小、体型(体重)越小,发病率和死亡率越高;公犬发病率明显高于母犬;春、秋季多发,以春季发病率最高。
- 王小兵稽辛勤龙丹丹
- 关键词：犬细小病毒
- 贵阳地区犬细小病毒VP2基因的克隆及遗传进化分析被引量：10
- 2017年
- 为研究贵阳地区犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)的流行基因型及其遗传进化情况,本试验对从贵阳市分离的10株CPV的VP2基因进行PCR扩增和克隆并进行序列分析。结果显示,分离的病毒能使F81猫肾细胞产生明显的细胞病变(CPE),分离的10株病毒中,7株为CPV-2a亚型,3株为CPV-2c亚型,命名为GY-1~GY-10。10株CPV分离株与疫苗株VP2基因的同源性98.4%~99.4%,与其他国内外参考株的同源性为97.7%~99.9%。本试验首次报道贵阳市CPV的流行基因型为CPV-2a亚型并伴随CPV-2c亚型存在,对监测CPV遗传变异趋势及疫苗的研制具有重要意义。
- 陈强嵇辛勤段志强阮涌雷云龙丹丹胡焱万彪
- 关键词：犬细小病毒基因型VP2基因遗传进化
- 一例犬眼球创伤性突出与下颌骨骨折的诊治
- 2022年
- 文章介绍了1例犬眼球创伤性突出与下颌骨骨折的诊治方法,通过临床检查、X光影像检查、血常规和血液生化检查进行诊断,经眼球摘除与下颌骨内固定手术后,患犬左眼伤口与下颌骨骨折愈合良好。
- 陈晶王晗晗嵇辛勤阮涌罗晓宇龙丹丹
- 关键词：眼球损伤下颌骨骨折诊治
- 鸭疫里默氏杆菌贵州分离株的耐药性及致病性分析被引量：14
- 2016年
- 从贵州三穗地区某鸭场临床疑似鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染的病死鸭体内分离得到6株病原菌,经细菌形态观察、生化试验和PCR鉴定确定为RA。对6株RA分离株的血清型鉴定、耐药性及致病性试验,结果表明:6株分离菌中有4株为血清2型,其余2株血清型未定;所有分离株对大环内酯类和氨基糖苷类药物耐药,而对青霉素类和头孢类药物高度敏感;将血清2型RA菌株以9×107cfu/m L剂量经肌肉注射后可导致雏鸭发病死亡,病死鸭表现典型的鸭疫里默氏杆菌病临床症状。结果表明,贵州三穗地区主要流行血清2型RA,且对多种抗生素呈多重耐药且致病性强,应加强对血清2型RA的监测和防控。
- 雷云嵇辛勤段志强陈佳琪陈强万彪胡焱龙丹丹
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌血清2型耐药性
