徐欣
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 黑曲霉糖化酶基因上游调控区的克隆与分析被引量：1
- 2012年
- 目的:通过基因工程方法改造糖化酶基因上游调控区,提高糖化酶产量提供研究。方法:以糖化酶生产菌黑曲霉为材料,通过PCR扩增获得糖化酶基因上游调控区片段PglaA。经测序比对发现该序列与GenBank中编号AM270061的序列相似性为100%。进一步的分析结果表明此序列含有2个保守的激活蛋白结合位点序列CCAAT和1个可能的葡萄糖阻遏位点CT-GGGG。结果:通过不同浓度葡萄糖对糖化酶合成的影响确定该菌株存在葡萄糖阻遏效应,当浓度到到3%以上时阻遏率高达70%以上,为葡萄糖阻遏位点预测结果提供了实验证据,并且经实验测得糖化酶活力随着接种量的增加而增加,当增加到5%时,相对酶活最高。
- 徐欣李杰
- 关键词：黑曲霉糖化酶阻遏多拷贝
- 脆壁克鲁维酵母基因置换技术的建立
- 2013年
- 以中性乳糖酶生产菌脆壁克鲁维酵母为材料,构建以kan基因为筛选标记、以脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因上游调控区为同源臂的质粒pPkan。将质粒pPkan电击转化脆壁克鲁维酵母,对受体菌生长时期、电场强度、电击后培养时间等条件进行优化。结果表明,以OD600为0.8的脆壁克鲁维酵母为受体、电压1.5 kV、电场强度为7.5 kV.cm-1、电击后培养时间为90 min,可获得较高的转化率,最高转化效率为2.37×102转化子.μgDNA。在电击转化的同时加入限制性内切酶10μL,对电击转化的转化率无显著影响。经PCR筛选证实87.5%的转化子为同源重组,从而建立一套有效的脆壁克鲁维酵母基因置换技术。
- 李杰曹宇婷徐欣张旭李璐吕洋卢松冲
- 关键词：电击转化同源重组基因置换
- 黑曲霉MAN1基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质分析
- 2011年
- 为了通过基因工程的方法在大肠杆菌中生产β-甘露聚糖酶。以β-甘露聚糖酶生产菌黑曲霉为材料,通过RT-PCR扩增获得β-甘露聚糖酶基因MAN1的cDNA片段,将该片段克隆连至pMD18-T并测序。Blast比对结果表明,该序列与GenBank中编号XM001400053的序列相似性为100%,将pMD18-MAN1与PET-32b进行双酶切后连接,构建原核表达载体pET-MAN1。酶切鉴定正确后,将该载体导入大肠杆菌BL21。重组菌株经IPTG诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE,并用DNS法的测定不同温度、不同pH下该融合蛋白的甘露聚糖酶活性。结果表明,经IPTG诱导,转化得到约62 ku的融合蛋白条带,IPTG最佳诱导表达时间是6 h,融合蛋白质以可溶组分形式存在。经DNS测定,重组甘露聚糖酶的最适温度为55℃,最适pH为5.5,在此条件下,甘露聚糖酶活力为48 IU.mL-1。研究结果以期为甘露聚糖酶的工业化生产探索新的途径。
- 张旭李璐曹雨婷徐欣李杰
- 关键词：Β-甘露聚糖酶大肠杆菌克隆
