闫帅
- 作品数：14 被引量：34H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省杰出青年科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 禽传染性喉气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备被引量：2
- 2012年
- 为制备抗鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gD的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达gD重组蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,经细胞融合筛选获得一株稳定分泌抗ILTV gD蛋白的杂交瘤细胞株,MAb亚型经鉴定为IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够识别ILTV。ILTV gD蛋白的MAb的制备,为ILTV检测方法的建立奠定了基础。
- 胡顺磊赵妍崔红玉石星明王玫张晶薛美张晓敏闫帅孔聪聪李巧玲牛秀杰王云峰
- 关键词：传染性喉气管炎病毒原核表达单克隆抗体
- 禽源U6启动子介导鸡马立克氏病病毒gI、gE基因特异siRNA的筛选及干扰活性鉴定
- 2011年
- 为筛选鸡马立克氏病病毒(MDV)gI、gE基因特异性siRNA,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA为模板,扩增禽源cU6-3启动子序列,并合成针对gI和gE基因各5个靶位点的10条shRNA序列。通过重叠PCR将cU6-3启动子与shRNA融合扩增制备shRNA表达盒,将制备的shRNA表达盒分别与重组质粒pEGFP-gI或pEGFP-gE共转染CEF细胞,并根据荧光显微镜观察和流式细胞仪检测结果评价siRNA抑制融合荧光蛋白表达的效率。结果表明,gI和gE基因的抑制效率为10%～80%。分别将其中抑制效率最高的一条shRNA插入pGEM-T载体中构建重组表达质粒pcU6-shgI735和pcU6-shgE936,通过不同细胞系稳定干扰试验和抑制病毒复制试验评价其干扰活性。结果显示,pcU6-shgI735和pcU6-shgE936能够明显抑制融合蛋白的表达及MDV在CEF细胞中的增殖,并且禽源U6启动子构建的表达盒在禽源细胞(DF1)中的活性比在哺乳动物细胞(Vero、MDCK)的活性高1.21～1.45倍。本研究鉴定获得了gI和gE基因的特异性siRNA,筛选出能够抑制MDV复制的靶位点,为MDV基因的功能和抗MDV病毒研究奠定了基础。
- 全炎铭崔红玉赵妍赵晓岩石星明高宏博闫帅张晓艳王玫王云峰
- 关键词：鸡马立克氏病病毒SIRNA
- 一株鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定及TK基因分析被引量：8
- 2012年
- 黑龙江省牡丹江市某养鸡场28周龄蛋鸡发生以呼吸困难、咳血和产蛋下降为主要症状的疾病。本研究利用特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的567 bp大小片段;将发病鸡喉头及分泌物处理后接种鸡胚,在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上形成痘斑。病毒接种鸡胚肾细胞48 h后电镜下可以观察到典型的疱疹病毒粒子形态,并且该分离株能够与ILTV单克隆抗体发生特异性反应。动物回归试验显示,感染的SPF鸡出现典型ILT症状,并能够从发病鸡体内重新分离到ILTV,由此判定该分离株为ILTV,并将其命名为MDJ0442。根据NCBI登录的ILTV序列(HQ630064)设计引物,以MDJ0442基因组为模板,PCR扩增TK的基因片段,进行测序和序列分析。结果表明,与其他ILTV参考病毒株相比,TK基因的核酸同源性为99.62%。本研究可以为ILTV的流行病学调查和分子生物学研究提供参考。
- 孔聪聪赵妍张晓敏崔红玉薛美胡顺磊闫帅李巧玲牛秀杰王云峰
- 关键词：传染性喉气管炎病毒TK基因
- 传染性喉气管炎病毒WG株糖蛋白gD基因主要抗原区的表达
- 2011年
- 为表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD蛋白,根据GenBank中登录的ILTV全基因组序列(EU675324)设计了1对引物,进行gD全基因的PCR扩增,产物经纯化后连接至pGEM-T Easy载体,进行序列测定,采用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的第256～405aa的编码片段设计引物并进行PCR扩增,结果获得截短的gD基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化E.coli BL21(DE3)。经IPTG诱导后,获得大小为43.5ku的重组蛋白,命名为r-gD。Western-blot分析结果表明,r-gD具有较强的抗原性。
- 魏秀英石星明张晶王玫赵妍胡顺磊崔红玉全炎铭闫帅陈洪岩王云峰
- 关键词：传染性喉气管炎病毒糖蛋白D
- 马立克氏病病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2013年
- 为了获得分泌抗鸡马立克氏病病毒(MDV)gE囊膜糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,将pGEX-6P-1表达的重组蛋白gE作为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,共筛选获得4株能够稳定分泌抗MDV gE蛋白抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚型鉴定结果表明,4株均为IgG1型,轻链为κ链。间接免疫荧光结果显示,4株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能特异性识别MDV,并具有一定的中和活性。本研究对MDV诊断、抗原表位分析及鉴定等具有重要的应用价值。
- 李巧玲崔红玉牛军伟闫帅高明杨红亚赵妍王云峰
- 关键词：马立克氏病病毒原核表达单克隆抗体
- 表达鸡新城疫病毒F蛋白的重组马立克氏病毒的构建及其鉴定被引量：2
- 2012年
- 为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(gpt)和MDV US2同源臂的中间转移载体pUAB-gpt中获得重组MDV转移载体pUAB-gpt-wF。将该转移载体与MDV-814疫苗株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA共转染CEF,经同源重组及gpt选择系统筛选,获得带有F基因表达盒的重组MDV(rMDV814-wF)。其体外增殖与亲本病毒没有差异。经间接免疫荧光试验、PCR、Southern-blot及western blot等试验证明,重组病毒在CEF中传至13代以上仍稳定表达NDV的F蛋白。该重组病毒的构建为MDV活载体疫苗的筛选及应用奠定了基础。
- 闫帅崔红玉李巧玲赵妍石星明赵晓岩胡顺磊王玫高明李越王云峰
- 关键词：马立克氏病毒重组病毒F基因
- 黑龙江散养鸡中一株乳酸菌的分离鉴定及益生特性和抗病毒特性研究被引量：6
- 2013年
- 为筛选具有优良益生及抗菌及抗病毒特性的禽源乳酸菌,本研究在黑龙江散养鸡新鲜粪便中分离出一株乳酸菌,经过菌落形态观察、革兰氏染色和菌体形态观察、API碳水化合物发酵试验鉴定以及16S rDNA序列的Mega Blast和LinnaeusBlast分析,鉴定为约氏乳杆菌,命名为LactobacillusjohnsoniiY 2。通过耐酸试验、抗胆盐试验、大剂量(8×109cfu)饲喂试验、体外抑菌试验和抗病毒(新城疫病毒La Sota株)试验表明,L.johnsoniiY 2可耐受pH 3.0的酸度和0.5%的高胆盐环境;大剂量饲喂无毒无害且具有增加采食量和增重的效果;具有较明显的抗菌和抗病毒作用。L.johnsoniiY 2显示出优良的益生特性,可作为益生菌候选菌株。
- 杨红亚崔红玉闫帅赵妍李巧玲王云峰何高明
- 关键词：乳酸菌益生特性
- 鸡传染性喉气管炎病毒TaqMan real-time PCR检测方法的建立被引量：4
- 2012年
- 为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;能够检测初始模板中10-3EID50的病毒核酸及16拷贝的标准品;与其它相关的鸡源病毒均无交叉反应,并且批内、批间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。该检测方法的建立为ILTV的临床检测和定量分析提供了一种快速、准确的技术手段。
- 赵妍孔聪聪张晓敏崔红玉石星明赵晓岩薛美胡顺磊闫帅牛秀杰李巧玲王玫王云峰
- 关键词：鸡传染性喉气管炎病毒GB基因TAQMANREAL-TIMEPCR
- 禽网状内皮增生症病毒gp90基因真核表达及ELISA检测方法的建立
- 石星明张晶魏秀英王玫赵妍胡顺磊蒿连微闫帅王云峰
- 禽网状内皮增生症病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2011年
- 为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株。经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,分别命名为A9E8和B3F8。2株细胞培养上清的效价均在1∶4×102以上,腹水效价均在1∶8×103以上。亚型鉴定结果表明,2株皆为IgG型,轻链均为κ链;Western blot及间接免疫荧光结果显示,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能识别REV全病毒抗原,与其发生特异性反应,并且不与禽类其他病毒发生反应;病毒中和试验结果表明,获得的单克隆抗体均能REV临床分离株发生中和反应,具有较好的中和活性。利用制备的单克隆抗体建立了REV的间接免疫荧光检测方法,临床病料检测结果表明,该方法与病毒分离及PCR的检测结果基本一致,阴、阳性符合率分别为100%和90%。作者制备了针对REV gp90的McAb,为REV的快速诊断及抗原表位分析与鉴定等奠定了基础。
- 石星明张晶赵妍王玫魏秀英胡顺磊全炎铭闫帅崔红玉王云峰
- 关键词：GP90基因单克隆抗体
