孙宏飞
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：西安交通大学医学部细胞生物学与遗传学系更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金陕西省教育厅省级重点实验室科研与建设计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 过表达miR-26b抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖被引量：4
- 2016年
- 目的构建miR-26b过表达载体,观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响。方法合成miR-26b DNA寡聚核苷酸单链,经退火形成双链;用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对pc DNATM6.2-GW-miR真核表达载体进行双酶切(大片段),纯化后与之前退火形成的DNA双链连接,转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α,扩增后提取质粒,经DNA测序和BLAST比对,验证其是否构建成功;将成功构建的pc DNATM6.2-GW-miR-26b载体瞬时转染MKN-45人胃癌细胞,采用实时定量PCR检测miR-26b的表达水平,Western blot法检测细胞分裂周期蛋白6(CDC6)蛋白,MTT法检测细胞增殖的变化。结果通过DNA测序BLAST比对结果显示成功构建了miR-26b的真核表达载体;瞬时转染MKN-45细胞后,实时定量PCR结果显示miR-26b的表达水平显著增加;Western blot结果表明过表达miR-26b明显抑制CDC6蛋白的表达,MTT法显示过表达miR-26b能显著抑制MKN-45细胞的增殖。结论过表达miR-26b可抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖。
- 张向前张敏张静王艳梅虎小毅孙宏飞童东东熊晓蕃赵正豪
- 关键词：真核表达载体胃癌MKN-45细胞细胞增殖
- miR-22表达载体的构建及其对结直肠癌细胞HCT116增殖的影响
- 2015年
- 目的构建pc DNATM6.2-GW-miR-22表达载体,并检测其对结直肠癌HCT116细胞增殖的影响。方法人工合成pre-hsa-miR-22基因片段,应用分子克隆技术构建pc DNATM6.2-GW-miR-22表达载体,酶切、DNA测序及BLAST验证;瞬时转染HCT116细胞,应用RT-PCR检测miR-22表达水平,MTT实验检测miR-22对HCT116细胞增殖的影响。结果酶切及测序结果验证miR-22表达载体构建成功;转染HCT116细胞后miR-22表达水平显著增高;MTT结果表明miR-22对细胞增殖具有抑制作用。结论本研究成功构建miR-22真核表达载体,证明miR-22高表达可以抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖。
- 张迁孙宏飞童东东韩佳杨阳黄辰
- 关键词：结直肠癌分子克隆HCT116细胞
- MicroRNA-17家族真核表达载体的构建及其对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的构建miR-17家族(miR-17、miR-20a、miR-20b、miR-93、miR-106a、miR-106b)真核表达载体,探究它们对人肝癌SMMC-7721细胞体外增殖的影响。方法通过Eco RⅠ和HindⅢ双酶切真核表达载体pc DNA6.2-GW/Em GFP-miR,得到大片段后与人工合成的miR-17家族成熟体5p的寡聚核苷酸连接,通过DNA测序、BLAST检验以及双酶切电泳方法验证是否成功构建miR-17家族的真核表达载体。将构建成功的载体,用Lipofectamine2000瞬时转染人肝癌SMMC-7721细胞,应用real-time PCR方法检测miR-17家族表达水平,用CCK8法检测细胞增殖能力的变化。结果双酶切真核表达载体pc DNA6.2-GW/Em GFP-miR,得到的大片段与人工合成的miR-17家族成熟体5p寡聚核苷酸连接,通过DNA测序、BLAST检验及双酶切电泳的方法验证成功构建了miR-17家族真核表达载体。瞬时转染人肝癌SMMC-7721细胞后miR-17家族表达水平有了显著增加,能够促进SMMC-7721细胞的体外增殖。结论成功构建miR-17家族真核表达载体,得到瞬时转染miR-17家族的人肝癌SMMC-7721细胞,并观察到miR-17家族过表达可以促进人肝癌细胞的增殖。
- 王晓霏孙宏飞陈妍珂赵凌宇杨阳宋土生黄辰
- 关键词：肝癌细胞增殖
