刘剑秋
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多巴胺D_1受体Ala229Thr多态性对受体信号转导功能的影响
- 2017年
- 目的:构建表达不同基因型的人多巴胺D_1受体(DRD_1)真核细胞表达载体,明确DRD_1Ala229Thr多态性对受体信号转导功能的影响。方法:从人基因组经PCR扩增DRD_1基因编码区全长,将纯化后的PCR产物与pMD_19-T载体进行T连接,得到DRD_1229Ala(野生型)重组克隆载体。在野生型重组克隆载体的基础上,应用定点突变方法构建229Thr(突变型)重组克隆载体。用KpnⅠ和EcoR Ⅰ双酶切野生型和突变型重组克隆载体,将酶切后得到的目的片段纯化后与经相同双酶切的pc DNA3.1(+)表达载体连接,即得到野生型和突变型DRD_1-pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体。将pc DNA3.1(+)空载体、野生型和突变型DRD_1-pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体瞬时转染入COS-7细胞,用c AMP ELISA试剂盒分别检测forskolin和不同浓度多巴胺及(±)-SKF38393处理下细胞内基础cAMP的水平及激动剂诱导的cAMP的水平。结果:经双酶切及测序证实野生型和突变型DRD_1-pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体构建正确。在forskolin处理的情况下,空载体组和阴性对照组细胞内cAMP的水平分别为(0.40±0.14)和(0.78±0.24)pmol/well,两者之间并没有显著差异(P=0.082),野生型组和突变型组细胞内c AMP的水平分别为(2.06±0.35)和(1.37±0.12)pmol/well,野生型组细胞内c AMP水平显著高于空载体组(P<0.001)和突变型组(P=0.007);在多巴胺及SKF38393处理的情况下,细胞内cAMP的水平均呈浓度依赖性升高,但突变型组细胞内的cAMP水平均显著低于野生型组(P<0.001)。多巴胺的EC_(50)值在野生型组为625 nmol/L,突变型组为9 612 nmol/L,比野生型组增加15倍;SKF38393的EC_(50)值在野生型组为421 nmol/L,突变型组为417 nmol/L,两者之间不存在明显差异。结论:本研究成功构建了野生型和突变型DRD_1-pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体;DRD_1Ala229Thr多态性影响受体的激活和信号转导功能,与野生型相比,229Thr型受体信号转导功能显著降
- 彭娟黎翠林刘剑秋李智
- 关键词：多巴胺D1受体信号转导CAMP
- TERT启动子突变在甲状腺癌中的研究进展被引量：5
- 2017年
- 甲状腺癌是内分泌系统常见的肿瘤之一,其发病率逐年上升。端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子突变(C228T,C250T)自2013年在甲状腺癌中被发现以来,其与甲状腺癌的关系即被广泛研究。绝大多数研究认为该突变与甲状腺癌的发生及临床病理特征以及不良预后息息相关,该突变为甲状腺癌致病基因突变。本文对TERT启动子突变在不同类型甲状腺癌中的发生及其临床意义进行综述,以期为TERT启动子突变在甲状腺癌中的研究及甲状腺癌的分子诊治提供新思路。
- 唐新月石峰黎翠林刘剑秋李智
- 关键词：甲状腺癌端粒酶逆转录酶启动子突变
