陈振海
- 作品数：9 被引量：96H指数：5
- 供职机构：福建省农业科学院更多>>
- 发文基金：福建省科技厅资助项目国家高技术研究发展计划福建省科委基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 伪狂犬病毒Fa株gB、gC、gD基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2007年
- 对猪伪狂犬病病毒闽A株（Fa株）gB、gC、gD基因进行了克隆和序列测定，结果表明：gB、gC、gD基因序列全长分别为2745bp、1464bp、1215bp，编码914、487、404个氨基酸残基组成的多肽。序列分析结果显示：Fa株与其他毒株gB、gC、gD基因核苷酸序列的同源性为94.9％-99.9％，氨基酸序列的同源性为91.4％-99.9％。不同PRV毒株gB、gC、gD基因在核苷酸和氨基酸水平上高度保守。基于gB、gC、gD基因的进化树分析表明，中国分离毒株与韩国分离毒株可归为一个进化分支，而日本分离株与欧美分离株归为另一个分支。在前一个分支里，闽A株与鄂A株的亲缘关系特别近，3个基因的同源率均在99.5％以上。在gB蛋白氨基酸序列全长上中国分离株（Ea株、Fa株）比欧美分离株多了1个氨基酸，氨基酸残基的突变主要集中在第50-100氨基酸。在gC基因序列第186-211bp，Ea株、Fa株比欧美分离株多插入了21个碱基。在gD蛋白氨基酸序列全长上，Ea株、Fa株比其他分离株多了2-6个氨基酸。在gD基因序列第803-837bp，Fa株核苷酸AGGCCC串联重复最多，达到7个。
- 陈振海林天龙陈少莺宋铁英
- 关键词：伪狂犬病毒GB基因GC基因GD基因
- 用重组腺病毒免疫方法制备伪狂犬病病毒gC蛋白单克隆抗体被引量：1
- 2007年
- 将表达伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）gC基因的重组腺病毒经肌肉免疫BALB/c小鼠,测试了重组腺病毒免疫小鼠制备抗目的蛋白单克隆抗体的效果。ELISA分析表明,BALB/c小鼠接种重组腺病毒后能产生针对gC蛋白的特异性抗体。给BALB/c小鼠用大肠杆菌表达的gC融合蛋白MBP-gC-NC加强免疫后第3 d,取小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞在PEG4000作用下进行杂交融合,经筛选、克隆,获得了3株稳定分泌抗PRV gC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1B4、1H4和2C8。单抗特性分析结果表明,1B4、2C8属IgG2a亚类,1H4属IgG1亚类;腹水抗体的ELISA效价为1∶2×10^5～1∶2×10^6;3株单抗都具有间接免疫荧光试验（IFA）和免疫印迹试验（Western-blotting）反应特性,能够特异地识别PRV gC蛋白。证实重组腺病毒免疫可用于制备目的蛋白单克隆抗体,为制备单抗提供了一种新的方法。
- 陈振海杨金先宋铁英刘晓东林天龙
- 关键词：重组腺病毒伪狂犬病病毒单克隆抗体
- 表达PRRSV GP2a/GP2b、GP3、GP4、GP5和M蛋白重组腺病毒的构建被引量：5
- 2007年
- 以PRRSV FJ-1a株为模板，采用RT—PCR法分别扩增出GP2a／GP2b-3，GP3，GP4、GP5和M蛋白基因片段，双酶切后插入穿梭质粒pDC316。利用AdMax^TM法，将5个重组穿梭质粒分别与腺病毒辅助质粒共转染293细胞，得到重组腺病毒Ad—GP2a／GP2b-3、Ad—GP3、Ad—GP4、Ad—GP5和Ad-M。重组腺病毒滴度为10^7.7～10^9.0 TCID50·mL^-1，而以Ad—GP5滴度最低，仅为10^7.7 TCID50·mL^-1。PCR检测第3、6、9代重组腺病毒稳定性，确证重组病毒均能稳定携带目的基因。对目的基因转录的RT—PCR鉴定结果显示，重组腺病毒分别感染293细胞后能转录产生目的基因mRNA。表达PRRSV主要囊膜蛋白基因重组腺病毒的获得，为进一步研制PRRSV基因工程疫苗，解析主要囊膜蛋白功能奠定基础。
- 陈振海林天龙俞伏松宋铁英龚晖方勤美杨金先
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒重组腺病毒囊膜蛋白
- 鱼源气单胞菌的分离鉴定及血清学调查被引量：18
- 2004年
- 应用生化鉴定和PCR技术对1999～2001年主要分离自福建省患典型败血症鳗鲡的气单胞菌进行精细的鉴定,结果共得到气单胞菌115株,其中嗜水气单胞菌69株,温和气单胞菌29株,豚鼠气单胞菌2株和未定种气单胞菌15株。45株可被典型分型于5个主要血清型;福建鳖源嗜水气单胞菌优势血清型为O∶Ah10501,鳗源气单胞菌分离株主要分布于O∶Ah10501、O∶YT-1、O∶CHS-3和O∶CQ-1等4个血清型。非福建分离株则集中分布在O∶Ah9617(O∶9)。LPSs免疫印迹法既能用于不同血清型菌株脂多糖的结构分析,又能对常规血清学分型结果进行校正,其结果更直观、准确。
- 董传甫林天龙俞伏松陈日升龚晖陈振海
- 关键词：嗜水气单胞菌血清学分型免疫印迹法分离株血清学调查
- 福建省欧洲鳗寄生虫病调查初报被引量：10
- 2000年
- 1996年 1 0月至 1 999年 8月对福建 6 8个欧鳗养殖场进行了欧鳗寄生虫病初步调查 ,结果表明 :欧鳗寄生虫病流行范围广、周期长 ,共查出 1 3种寄生虫为原虫 8种 ,蠕虫 5种。其中车轮虫、两极虫、小瓜虫和拟指环虫危害最为严重 ,阳性检出率分别高达 78%、 76 %、 5 7.1 %和 33.5 %。
- 俞伏松林天龙龚晖杨金先陈强许斌福陈振海
- 关键词：寄生虫病
- 欧洲鳗夏季暴发性疾病病因及其综合防治研究
- 林天龙俞伏松龚晖陈强杨金先许斌福陈振海陈日升林能锋钱午巧吴城
- 该项目确定了嗜水气单胞菌是欧洲鳗夏季暴发病的主要病原。建立了先进、实用的免疫学和分子生物学快速诊断系列检测技术：制备了抗嗜水气单胞菌的单克隆抗体用于嗜水气单胞菌的精确分型；建立了嗜水气单胞菌的菌体凝集、ELISA、DOT...
- 关键词：
- 鳗源嗜水气单胞菌β-溶血素基因的克隆及表达被引量：24
- 2003年
- 应用PCR技术,从1株鳗源嗜水气单胞菌ML316中扩增得到β 溶血素基因AHL316HEM,将AHL316HEM克隆到pGEM TEasyVector,经分析验证后重组到pcDNA3.0中,构建了重组质粒PDLH。转化重组质粒PDLH的大肠杆菌(Escherichiacoli)DH5α能在血琼脂培养皿中形成明显的β 溶血斑,重组菌纯化的胞外产物溶血价为1.28×104HU·mg-1,同时重组菌的胞外产物能被原始菌株的高免血清特异性地识别。结果证实,克隆到鳗源嗜水气单胞菌β 溶血素基因,重组质粒PDLH能够表达具有天然生物学活性的β 溶血素,为构建嗜水气单胞菌核酸疫苗奠定了基础。
- 龚晖林天龙俞伏松董传甫陈日升杨金先陈振海
- 关键词：基因克隆疫苗鱼类暴发性疾病致病菌
- 鱼类DNA疫苗研究的新进展被引量：6
- 2003年
- 陈振海林天龙夏春
- 关键词：鱼类DNA疫苗预防接种免疫激活
- 欧鳗嗜水气单胞菌的分离、鉴定和特性分析被引量：31
- 2001年
- 20 0 0年夏季福建地区许多鳗场养殖的欧洲鳗暴发以脱粘、败血为主要症状的疫病 ,从不同来源的濒死鳗鱼体内分离到 4株细菌。细菌的形态学、生化分析和补充试验结果符合嗜水气单胞菌的各项指标 ,PCR检测 4株分离菌均扩增出特异性的气溶素基因 (aer A) 2 0 9bp片段及脂酶基因 (L ip) 76 0 bp片段 ,进一步证实这些分离菌为嗜水气单胞菌并存在毒力基因。人工造病实验结果表明 ,分离株 M0 0 0 812 0 5 1的菌体纯培养物和胞外产物对昆明小白鼠和欧洲鳗分别具有中等和高度的致病力 。
- 林天龙陈日升董传甫俞伏松杨金先陈红燕陈振海
- 关键词：嗜水气单胞菌欧鳗生理特性生化特性
