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土壤磷素高效利用转基因大豆特异性PCR检测方法被引量：1: 2012年; 华南农业大学根系生物学研究中心采用拟南芥的紫色酸性磷酸酶基因AtPAP15转化大豆品系粤春03-3(YC03-3),获得了酸性磷酸酶活性明显提高、可高效利用土壤磷素的转基因大豆新品系AP15-1。本研究以AP15-1为研究对象,应用TAIL-PCR技术,根据载体序列设计特异引物,获得了转化载体左侧插入的旁邻序列。设计事件特异性检测引物,进行PCR扩增,只能在AP15-1的样品中扩增出特异性条带,进一步用实时荧光定量PCR作分析,结果显示,该引物对重复性好,融解曲线显示只有一个特异峰值。本实验应用该引物对建立的检测方法,检测的灵敏度可以达到0.01%,实时荧光定量PCR检测的极限值可以达到9个基因组的拷贝数,能够满足对转基因大豆新品系AP15-1及其衍生品种检测的需要。; 姚涓潘志文陈伟庭周峰穆虹姜大刚梅曼彤; 关键词：转基因大豆 TAIL-PCR 定量PCR

转基因番木瓜阳性质粒分子的构建和应用: 2022年; 转基因抗病番木瓜已经获得了全球多个国家的商业化应用和进口批准。为了解决转基因番木瓜检测工作中存在阳性对照不易获取的问题,本研究通过基因数据库(美国国家生物信息中心,NCBI),筛选番木瓜内标准基因Papain和Chymopapain基因以及已经报道的番木瓜转化体‘华农1号’、‘55-1’和‘GM YK’的特异性序列,构建了转基因番木瓜阳性质粒分子,并对其特异性、灵敏度以及适用性进行了验证分析,结果表明:该阳性质粒分子包含的5个外源片段的扩增产物条带清晰、特异性好,检测灵敏度高,可以稳定地检测出100个拷贝的质粒分子;同时对质粒分子的适用性进行了测试,结果显示,构建的质粒分子可以应用于番木瓜组织和加工品的转基因检测中。由此表明本研究构建的转基因番木瓜阳性质粒分子可以作为阳性对照应用于转基因番木瓜的特异性检测。; 陈伟庭高洁儿潘志文周峰王声斌姜大刚姚涓; 关键词：转基因番木瓜

转基因玉米筛选检测阳性标准分子的构建和应用被引量：2: 2014年; 为了满足转基因玉米成分检测中阳性对照不易获得及不易长久保存的缺陷,通过分析公共数据库资源,建立了包含玉米内标准基因z SSIIb及遗传转化中常用的Ca MV35S启动子、nos启动子、Ca MV35S终止子、nos终止子的的标准分子。灵敏度检测发现,在检测体系中含有1 000个分子时,可以非常清楚扩增到所有5个片段的目的条带。随机挑选我国批准进口的7种转基因玉米,对标准分子进行验证,结果表明,在相应的阳性样品和标准分子中都能扩增到特异的目的条带,构建的标准分子可以满足作为转基因玉米筛选检测中阳性对照的要求。; 姚涓潘志文陈伟庭高洁儿姜大刚; 关键词：转基因玉米

转基因番木瓜基因组DNA的快速制备和PCR检测方法: 2021年; 转基因番木瓜检测中,模板DNA的制备是关键一步。为了提高检测效率,建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要。建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法,包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清。在完成不同番木瓜样品的基因组DNA快速制备后,对获得的DNA进行PCR检测验证。普通PCR验证结果显示,本方法制备的叶片和果肉基因组DNA溶液稀释5倍时,PCR扩增条带清晰,更高稀释倍数时,叶片基因组DNA扩增条带强于果肉基因组DNA;实时荧光PCR验证结果显示,叶片基因组DNA的PCR扩增效率位于合理区间。灵敏度测试结果表明,含量低至0.1%的叶片和果肉样品,内标准基因和外源基因特异性片段普通PCR和实时荧光PCR均能得到预期扩增,且重复性较好。本研究建立的番木瓜基因组DNA快速制备与PCR方法效果良好,体系稳定。; 潘志文陈伟庭高洁儿周峰姚涓王声斌姜大刚; 关键词：转基因番木瓜 DNA制备 PCR

转基因番木瓜pUC57-Papaya质粒标准分子的构建与适用性研究: 2023年; 构建了含番木瓜2个内标准基因、4个筛选靶标及3个转化体特异性片段的质粒分子pUC57-Papaya,进行了适用性验证实验。应用普通PCR和实时荧光定量PCR对其进行互换性评估;使用质粒分子对2个样品进行转基因含量测定。结果显示:质粒分子全部9个目的片段按照设计排列,序列完全一致;全部9个基因片段普通PCR和实时荧光PCR方法均能正确扩增得到预期结果,特异性、灵敏度与基因组DNA一致;全部9个基因构建标准曲线做定量测试时,与基因组DNA标准曲线斜率无显著差异,线性相关系数均大于0.99,其中内标准基因Papain、NOS终止子、YK1601与55-1事件特异性片段的截距无差异;利用质粒分子测量2个样品的Papain、NOS终止子、YK1601与55-1事件特异性片段拷贝数,计算转基因含量,结果与基因组DNA一致;测序结果显示各片段拷贝数比值为1,质粒DNA拷贝数浓度为(2.54±0.10)×10^(6)copies/μL。构建的标准质粒分子可代替基因组DNA用于定量检测,也可作为转基因番木瓜定性和定量检测用标准物质。; 潘志文陈伟庭姚涓王声斌姜大刚; 关键词：计量学转基因番木瓜

基因组编辑技术在植物中的应用研究进展被引量：2: 2020年; 基因组编辑技术以准确、高效、简单的操作而发展迅速,近年来以CRISPR/Cas系统为代表的基因组编辑技术在基因功能研究、疾病治疗、植物分子育种等方面取得了重要进展。为后续相应研究提供参考,总结锌指核酸酶(ZFNs)、类转录激活因子效应物核酸酶(TALENs)、成簇规律间隔短回文重复与关联蛋白(CRISPR/Cas)系统的原理及特点,着重介绍CRISPR/Cas技术在植物中的研究应用进展,对植物基因组编辑技术发展前景进行了展望。; 潘志文高洁儿陈伟庭周峰姚涓姜大刚; 关键词：植物锌指核酸酶

转基因水稻外源基因向稗草的漂移研究被引量：6: 2011年; [目的]研究转基因水稻中外源基因向同科杂草稗草的基因漂移情况。[方法]利用农杆菌介导的方法,获得稳定遗传的转hpt基因水稻株系,对转基因水稻田中自然生长和人工种植的稗草种子进行PCR检测,确定是否含有转基因成分。[结果]通过对多株杂草稗种子获得的22 000株幼苗的PCR检测,均未能检测到外源基因的存在。[结论]未发现稳定遗传的转基因水稻中外源基因向稗草的漂移。; 姜大刚姚涓陈伟庭潘志文周峰梅曼彤; 关键词：水稻稗草基因漂移

基因组编辑植物的监管与检测技术被引量：1: 2021年; 基因组编辑技术是利用人工核酸酶对生物体目标基因序列进行修饰的技术。近年来,以CRISPR/Cas系统为代表的基因组编辑技术由于高效、简单的操作发展迅速,为研究动植物基因功能、疾病治疗、植物分子育种等方面提供重要的方法。同时,由于基因编辑产品的不断出现,为政府监管提出了更高的要求。通过介绍植物基因组编辑技术及其产品的种类,重点说明了主要国家、经济体在植物基因组编辑产品的安全监管的异同,概述了科学界对基因编辑作物的基本原则,并介绍了几种植物基因组编辑产品的检测方法。; 潘志文张旭冬高洁儿刘鹏程姚涓张秀杰姜大刚; 关键词：CRISPR 转基因

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潘志文