李树强
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：河北科技大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“十二五”国家科技计划农村领域更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种产黄青霉突变体库的简单快速构建方法被引量：1
- 2019年
- 产黄青霉(Pennicillium chrysogenum)是重要的工业丝状真菌,为更好地提高青霉素产量,了解青霉素合成的调控途径及相关基因的功能,突变体库的构建是一种有效途径。本研究以PCR扩增得到的T-DNA片段为外源DNA,通过PEG介导转化至产黄青霉原生质体中,成功地将含有外源博来霉素抗性基因(ble)和绿色荧光蛋白基因(gfp)的T-DNA插入到产黄青霉基因组中,构建了产黄青霉突变体库,并实现了ble基因和gfp基因在产黄青霉中的表达。该方法不依赖于农杆菌介导,无需构建二元表达载体,只需一步PCR即可实现外源基因的制备,简单快速,也为研究其它真菌基因功能和突变体库构建提供参考。
- 韩梁彦李树强王丽丽张春晓
- 关键词：产黄青霉突变体库T-DNA
- 产黄青霉简单高效遗传转化法——电激转化法被引量：3
- 2014年
- 目的研究产黄青霉(P.chrysogenum)电激转化方法,建立产黄青霉快速、高效的遗传转化方法。方法应用美国Bio-Rad电转仪,将外源DNA转化入产黄青霉菌丝中,研究了菌丝培养时间、电场强度、DNA类型等对遗传转化的影响。结果菌丝培养24h,处于旺盛生长阶段,电场强度为6000V/cm,电阻200Ω,电容20μF,环状质粒DNA较线状能获得转化效率稍高,1μg DNA获得的克隆数可达500个。结论应用电激转化方法对产黄青霉进行遗传转化属首次报道,特别是可直接将目的片段与T-DNA相融合,转化入产黄青霉中,该方法操作简单,快速高效。
- 李树强仪修南贾亚娟张春晓
- 关键词：产黄青霉菌丝T-DNA
