王金冬
- 作品数：13 被引量：21H指数：3
- 供职机构：潍坊医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国高等教育学会医学教育专业委员会医学教育研究立项课题山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学社会学更多>>
- 针对糖尿病易感基因Vβ13的慢病毒系统的建立及其对T细胞的转导被引量：1
- 2017年
- 目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,有效沉默连接红色荧光蛋白mCherry与靶基因1型糖尿病易感基因Vβ13的表达,建立一种简便有效基因沉默的系统,并初步研究慢病毒感染T细胞的可能性。方法以Vβ13 mRNA编码序列作为干扰靶点,以慢病毒质粒UTG作为载体,构建靶向Vβ13的shRNA表达质粒,构建携带Vβ13的m Cherry红色荧光蛋白的质粒作为验证shRNA有效性的靶点,并转染293FT细胞。通过红色荧光的表达及RT-PCR和Western blot确定最佳沉默Vβ13序列后,将有效的UTG-Vβ13质粒与辅助质粒共转染293FT细胞,低温超高速离心,获取高滴度慢病毒。应用慢病毒感染大鼠T细胞,光镜观察T细胞被慢病毒感染的情况,流式细胞术检测T细胞的绿色荧光表达情况。结果成功构建Vβ13-shRNA慢病毒载体UTG-shRNA-Vβ13,RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染的293FT细胞Vβ13 mRNA及蛋白表达相对于对照组显著降低。构建的慢病毒可以成功感染T细胞。结论红色靶基因-绿色慢病毒系统具有简便的筛选性能;UTG慢病毒对神经干细胞具有较高感染效率。可作为一种良好的基因导入载体,实现慢病毒介导的RNA干扰在T细胞内的有效表达,并为T细胞过继性转移的相关研究提供技术支持。
- 杜宇王金冬张曼尹凌轩李文通李娇刘志军
- 关键词：1型糖尿病慢病毒绿色荧光蛋白
- 藻酸双脂钠联合更昔洛韦在体外抗人巨细胞病毒感染的效果研究（英文）被引量：1
- 2017年
- 目的研究藻酸双脂钠(PSS)联合更昔洛韦(GCV)在体外抗人巨细胞病毒(HCMV)感染的作用。方法应用体外细胞培养技术构建HCMV-AD169感染人胚肺成纤维细胞(HELF)模型,对照组采用GCV(50mg·L^(-1))单一药物,实验组采用PSS(100mg·L^(-1))和GCV(50mg·L^(-1))的联合药物,应用两组药物同时对模型进行干预,观察干预后两组的特征性致细胞病变效应(CPE)的变化,同时应用RT-PCR法检测用药后两组HCMV的IE2的表达情况。结果实验组和对照组均可提高感染细胞的存活率,同时降低感染细胞中HCMV IE2的mRNA表达量。显微镜下形态学观察显示,相比对照组,实验组能明显降低药物对HELF细胞的毒性作用,提高细胞存活率。结论 PSS联合GCV具有良好的体外抗HCMV作用,二者具有协同抗病毒作用。
- 王金冬孙延龙杜宇李文通吴洪娟王刚姜子童阮极盟刘志军
- 关键词：更昔洛韦藻酸双脂钠人巨细胞病毒
- 翻转课堂在留学生医学微生物学教学中的应用探讨被引量：3
- 2018年
- 目的:探讨留学生医学微生物学教学改革的新思路,提升教学效果。方法:选取《医学微生物学》某一章节内容作为实验对象,以2014级留学生作为对照组和实验组,对照组采用传统课堂讲授法,实验组进行"小组竞赛式"翻转课堂教学。通过阶段性成绩考核和问卷调查比较两组教学效果的差异。结果:测试成绩比较,实验组明显组优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.001);对实验组学生进行调查发现,大多数留学生对"小组竞赛式"翻转课堂持正面评价,认为该教学法能有效提升医学微生物学教学效果。结论:"小组竞赛式"翻转课堂适用于留学生医学微生物教学,在提高学习效果、培养自学能力和团队协作精神方面效果显著。
- 王金冬吴晓燕王红艳付玉荣刘志军
- 关键词：医学微生物学留学生
- 基于临床案例的基础医学联合实验技能竞赛的实施与探索被引量：2
- 2022年
- 目的:探讨基础医学联合实验技能竞赛在临床医学专业中的实施效果。方法:竞赛以临床案例为基础,整合多门医学基础学科相关实验内容,通过综述论文写作、实验设计与技能操作、实验报告以及小组答辩等多种形式展开。分析学生的竞赛成绩以及对比竞赛前后问卷调查结果,了解竞赛的实施效果。结果:技能竞赛能有效强化学生对基础知识的掌握,促进自主学习、临床思维、实践应用等能力的培养。结论:跨学科基础医学联合实验技能竞赛在巩固知识、强化实践性与创造性以及培养学生综合素质能力等方面发挥着重要作用。
- 王金冬刘志军杜宪红吴晓燕王红艳王超付玉荣
- 海藻提取物对病毒感染的大鼠1型糖尿病Vβ13基因表达及Treg细胞的影响(英文)
- 2017年
- 目的观察Vβ13mRNA和Treg细胞在大鼠细小病毒(KRV)联合巨细胞病毒(CMV)感染大鼠的脾淋巴细胞中的表达以及海藻提取物对1型糖尿病的治疗效果。方法 LEW.1WR1大鼠40只,随机分成2组,应用CMV联合KRV建立大鼠1型糖尿病模型。治疗组大鼠每日口服海藻提取物共40d;成模组用等量无菌生理盐水替代同步进行。RT-PCR检测脾脏Vβ13mRNA的表达,流式细胞术检测脾细胞Vβ13^+CD4^+CD25^+Treg细胞亚群比例;HE染色观察糖尿病胰岛的病变情况。结果实验组成模率为90%(18/20),成模血糖平均水平在3.15g/L;实验组Vβ13的表达高于治疗组。实验组中CD4^+CD25^+Treg细胞的比例为6.2%,治疗组为13.5%(P<0.05)。结论感染巨细胞病毒的大鼠Vβ13 mRNA的表达在糖尿病初期显著增高。Vβ13^+CD4^+CD25^+Treg细胞亚群比例较低。海藻提取物提高了LEW.1WR1大鼠Treg细胞的表达,可用于治疗糖尿病。
- 管福来尤敏孙延龙李文通王金冬吴晓燕姜子童刘志军
- 关键词：巨细胞病毒1型糖尿病海藻提取物TREG细胞
- 案例教学在医学微生物大班教学中的应用被引量：5
- 2019年
- 目的:探讨案例教学法在临床医学专业医学微生物大班教学中的实施效果。方法:随机选取临床医学专业两个教学班作为对照组和实验组,对照组采用传统课堂讲授法,实验组实施案例式教学。通过成绩分析比较两组教学效果的差异。结果:期末总成绩以及不同类型题目成绩(记忆、理解和应用),实验组均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:案例教学法能有效提高医学微生物学教学效果,适用于临床医学专业大班教学。
- 王金冬吴晓燕王红艳付玉荣刘志军
- 关键词：案例教学医学微生物学临床医学专业
- GII.4型人诺如病毒VP2蛋白的原核表达与多克隆抗体制备
- 2023年
- 目的原核表达GII.4基因型人诺如病毒(human norovirus, HuNoV)次要衣壳蛋白VP2并制备多克隆抗体。方法设计特异性引物扩增GII.4 HuNoV的VP2全基因, 酶切连接至原核表达载体pGEX-6P-1, 将鉴定正确的重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞。挑取单克隆摇菌, 加入IPTG诱导重组GST-VP2融合蛋白的表达, 经GST亲和层析纯化和酶切, 获得GII.4 HuNoV VP2蛋白。通过SDS-PAGE分析纯化后HuNoV VP2蛋白相对分子质量。将纯化的GII.4 HuNoV VP2蛋白(0.5 mg/ml)免疫BALB/c小鼠, 制备多克隆抗体。结果 GII.4 HuNoV VP2蛋白被成功表达和纯化, 相对分子质量(Mr.×103)约29。将GII.4 HuNoV VP2蛋白免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体滴度高达1∶1 280 000。Western blot与间接ELISA分析显示该多克隆抗体能和GII.4 HuNoV VP2抗原特异性结合。结论利用原核表达系统成功表达了GII.4 HuNoV VP2蛋白, 并成功制备出高效价GII.4 HuNoV VP2多克隆抗体。
- 马亚林王金冬王金冬章青孔翔羽段招军
- 关键词：诺如病毒VP2蛋白原核表达多克隆抗体
- 一种用于糖尿病溃疡面的创可贴
- 本发明提供了一种用于糖尿病溃疡面的创可贴，薄膜，泡棉和外层保护膜，所述的泡棉通过胶水粘于所述的薄膜内侧面，所述的外层保护膜覆于所述的薄膜和泡棉上；所述的泡棉内含有药剂，所述的药剂为主要含有虎杖苷、地榆鞣质、癸酰乙醛和葛根...
- 陈亚文刘志军郑安周李文通张曼王金冬翟赵昱阳
- 文献传递
- 表达呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的重组人5型腺病毒的构建
- 2023年
- 目的筛选并构建成功表达A亚型人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,HRSV)融合前构象F蛋白的重组人5型腺病毒(Recombinant Human type5 adenovirus,rHADV-5),为制备和研发HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定基础。方法在真核表达载体pcDNA3.1(+)上插入具有不同突变位点的HRSV F蛋白编码序列,利用融合前F蛋白单克隆抗体AM14和D25筛选HRSV F蛋白突变体;通过同源重组将筛选出的前构象F蛋白突变体编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体,在HEK293细胞中进行重组病毒的包装和扩增,经氯化铯密度梯度法获得纯化的重组病毒;应用夹心ELISA法和Western blot鉴定F蛋白的表达及构象。结果通过AM14和D25单克隆抗体筛选出了2个稳定维持在融和前构象的HRSV F蛋白序列(SC-3M和SC-5M)。将SC-3M和SC-5M编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体,对两种重组人5型腺病毒(pAd5-SC-3M和pAd5-SC-5M)和空载体(pAd5-vector)纯化,病毒滴度分别达到2.016×10^(10),2.52×10^(10)和2.948×10^(11)IU/mL。pAd5-SC-3M和pAd5-SC-5M感染HEK293后均能高效表达HRSV融合前构象的F蛋白并维持三聚体结构,且pAd5-SC-5M感染细胞中F蛋白表达量高于pAd5-SC-3M。结论成功在体外传代细胞中获得可高效表达A型HRSV融合前F蛋白的重组人5型腺病毒,为进一步通过动物试验评价该HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定了基础。
- 马亚林柴鹏弟王金冬毛彤瑶张鹏李慧莹段招军
- 关键词：人呼吸道合胞病毒HEK293细胞
- 一种人巨细胞病毒IgM抗体检测试纸的制备方法
- 本发明提供了一种人巨细胞病毒IgM抗体检测试纸的其制备方法，具体步骤如下：(1)先制造试纸承载板和试纸；试纸由滴样垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸样垫组成；(2)将滴样垫粘贴于试纸承载板的一端，滴样垫的一端粘接胶体金结...
- 崔齐刘志军王文涛黄亦巍张曼李宏政王金冬
