毛青
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
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- miR-206对膀胱癌细胞生长的影响及分子作用机制研究
- 2018年
- 目的 探讨miR-206对膀胱癌细胞T24和5637生长的影响及分子作用机制.方法 根据对膀胱癌细胞的不同处理,分为对照组（转染miR-NC）和实验组（转染miR-206）.EdU增殖实验和集落形成实验检测转染后膀胱癌细胞的增殖能力.流式细胞术检测膀胱癌细胞转染后的细胞周期分布.荧光实时定量PCR（qRT-PCR）和Western Blot检测CDK4和GAK表达水平的变化.结果 EdU增殖实验显示转染miR-206的膀胱癌细胞的增殖能力明显下降.集落形成实验显示,相比转染miR-NC组,miR-206组膀胱癌细胞形成的集落数数量更少.流式细胞术结果显示,转染miR-206后膀胱癌细胞在S期和G2/M期的细胞比例明显下降,而在G0/G1期的细胞比例明显升高.qRT-PCR和Western Blot结果显示,相比miR-NC,转染miR-206后T24和5637中CDK4和GAK表达水平均明显下降（P＜0.01）.结论 miR-206可显著抑制膀胱癌细胞的生长,其机制为miR-206干扰CDK4和GAK的表达,抑制膀胱癌细胞的细胞周期进展.
- 黄耿姜卫东毛青桂定文
- 关键词：膀胱肿瘤细胞增殖细胞周期
- miRNA-370对肾癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的调控作用及其对细胞生长的影响被引量：1
- 2017年
- 目的 探讨miRNA-370（miR-370）对肾癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的调控作用以及对细胞生长的影响.方法 采用脂质体Lipofectamine 3000将已知的缺少人类基因同源性的dsRNA（对照组）和miR-370（实验组）分别转染ACHN和786-O细胞.采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白印迹法分别检测p21 mRNA和蛋白的表达变化.流式细胞术鉴定细胞周期分布,采用MTS法和集落培养实验检测细胞活力和增殖能力.结果 在ACHN细胞中,对照组和实验组中p21 mRNA的表达量分别为1.04±0.33、3.68±0.62,两者比较差异有统计学意义（t=7.535,P〈0.001）.在786-O细胞中,对照组和实验组中p21 mRNA的表达量分别为1.04±0.31、3.15±0.29,两者比较差异有统计学意义（t=9.975,P〈0.001）.在两种细胞中,实验组p21 mRNA表达与对照组相比均上调.蛋白印迹法检测结果显示,p21蛋白表达水平增加,与p21 mRNA水平上调一致.ACHN和786-O细胞转染miR-370后,细胞周期被阻滞在G0-G1期.MTS结果显示,在ACHN细胞中,对照组和实验组中细胞形成的集落数分别为（113±30）、（53±17）个,两者比较差异有统计学意义（t=2.982,P=0.041）.在786-O细胞中,对照组和实验组中细胞形成的集落数分别为（106±27）、（50±16）个,两者比较差异有统计学意义（t=3.089,P=0.037）.在两种细胞中,实验组形成的集落数与对照组相比均减少.结论 miR-370可上调肾癌细胞中抑癌基因p21的表达,并抑制肾癌细胞的生长.
- 黄耿姜卫东毛青桂定文
- 关键词：微RNAS
- miR-1236模拟物转染对前列腺癌细胞生长影响被引量：1
- 2017年
- 目的 miR-1236为新发现的具有肿瘤抑制作用的RNA。本研究旨在探讨外源性miR-1236转染对前列腺癌细胞p21基因的激活作用及对其生长的影响。方法根据对前列腺癌细胞的不同处理分为阴性对照组(转染dsControl)和实验组(转染miR-1236)2组。qRT-PCR检测p21、细胞周期依赖性激酶CDK4和CDK6mRNA的表达变化。蛋白质印迹检测p21、CDK4和CDK6蛋白的表达变化。流式细胞术检测细胞周期分布。MTS法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖能力。结果与dsControl组相比,转染miR-1236后2种细胞中p21mRNA表达分别上调2.16(t=12.67,P<0.01)和2.26倍(t=10.93,P<0.01);CDK4mRNA的表达分别下调0.56(t=6.617,P<0.01)和0.43倍(t=5.698,P<0.01);CDK6mRNA的表达分别下调0.78(t=3.101,P<0.05)和0.71倍(t=3.841,P<0.01)。蛋白质印迹检测结果与qRT-PCR结果相符。流式细胞术结果显示,转染miR-1236后,位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,位于G0/G1期的细胞比例明显增大。MTS法显示,与dsControl组相比,转染miR-1236 2种细胞活力明显下降。dsControl组DU145和PC-3细胞形成的集落数分别为241±37.64和254.33±38.18;miR-1236组DU145和PC-3细胞形成的集落数明显减少,分别为99.67±34.2(t=3.939,P<0.05)和81±35.55(t=4.354,P<0.05),提示细胞增殖能力降低。结论外源性miR-1236能通过激活前列腺癌细胞中p21蛋白的表达并显著抑制其生长,可能成为前列腺癌基因靶向治疗的新靶点。
- 黄耿毛青桂定文姜卫东
- 关键词：前列腺癌P21
- 人工合成小分子RNA对前列腺癌细胞周期及增殖的影响
- 2017年
- 目的 研究人工合成的dsP21-555对前列腺癌细胞株PC-3和LNCaP细胞周期和增殖的影响.方法 合成dsP21-555（实验组）和dsControl（阴性对照组）,分别转染至PC-3和LNCaP.使用Real-time PCR及Western blotting分别检测分析前列腺癌细胞转染后的p21 mRNA及p21蛋白的表达情况.流式细胞术检测细胞周期分布,使用MTF实验及集落形成实验检测细胞的活力及增殖能力.结果 转染dsP21-555后PC-3和LNCaP细胞中的p21mRNA水平分别上调至2.90倍（P＜0.01）和2.05倍（P＜0.01）.Western blotting实验结果符合这一趋势.流式细胞术检测显示,转染dsP21-555后,在S期和G2/M期的细胞比例下降,在G0/G1期的细胞比例则增加.MTT实验显示,与dsControl组相比,转染dsP21-555后,PC-3和LNCaP细胞的活力明显降低.集落形成实验显示,dsP21-555组的集落的数量较少,细胞增殖能力降低.结论 人工合成的dsP21-555能明显激活前列腺癌细胞中p21基因的表达,并显著抑制前列腺癌细胞周期的进展和增殖.
- 黄耿姜卫东毛青桂定文
- 关键词：前列腺肿瘤RNA细胞周期细胞增殖
- 川芎嗪对人肾癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：4
- 2017年
- 目的分析不同浓度川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对人肾癌细胞系(786-O)增殖及凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法体外培养786-O细胞,与不同浓度川芎嗪溶液(0.5mmol/L、5mmol/L)及溶剂组(DMSO组)作用24、48和72h后,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖率;细胞计数法检测药物作用48h后的细胞数量变化;DAPI染色观察药物作用48h后细胞核形态;半定量RT-PCR技术和Western blot法检测药物作用48h后凋亡相关基因在转录和翻译水平的改变。结果随着川芎嗪药物浓度的增加,786-O细胞增殖率显著降低,凋亡率增加,细胞数量也显著减少,且胞核出现皱缩或肿胀,核裂增多;凋亡相关基因AIF、caspase-3在转录及翻译水平上均显著增强,无论与空白对照组还是溶剂对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究证实TMP可以显著抑制人肾癌细胞系786-O细胞的增殖,促进其凋亡,为中药抗癌方面的研究提供实验室证据。
- 亓俊华聂刚聂刚周润姚伟毛青罗鹏程
- 关键词：川芎嗪细胞增殖细胞凋亡
- 姜黄素抑制人肾癌细胞769-P增殖及促凋亡的实验研究被引量：2
- 2018年
- 目的 分析不同浓度姜黄素（curcumin,分子式C21H20O6）对人肾癌细胞769-P的生物学作用及其调控机制.方法 体外培养人肾癌细胞769-P,用不同浓度姜黄素处理24 h后,采用MTT比色法测定姜黄素对细胞的增殖抑制作用,利用倒置显微镜观察细胞的显微形态结构,采用细胞划痕法观察细胞的迁移情况;Western Blot法检测细胞内Caspase-3、AIF蛋白质的表达情况;用反转录PCR法检测AIF、Bax mRNA的表达水平.结果 MTT法检测显示姜黄素能显著抑制人肾癌细胞系769-P的增殖,呈现浓度和时间效应关系;倒置显微镜结果显示姜黄素能够使肾癌细胞系的形态学发生改变,呈现出典型凋亡特征如核皱缩、核破裂、核肿胀等形态;细胞划痕实验显示,姜黄素抑制了肾癌细胞系的迁移;RT-PCR实验显示,姜黄素促进了BAX mRNA和AIF mRNA的表达;蛋白杂交实验显示,姜黄素促进了Caspase-3和AIF蛋白的活化,从而促进了凋亡.结论 姜黄素能显著抑制人肾癌细胞的增殖并促进其凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax和AIF表达,活化Caspase-3的信号通路有关.
- 徐秀鹏亓俊华张青毛青罗鹏程
- 关键词：肾肿瘤细胞增殖姜黄素
- 外源性dsRNA对肾透明细胞癌细胞中p21表达的影响
- 2017年
- 目的 探讨dsP21-555转染对肾透明细胞癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的影响.方法 肾透明细胞癌细胞分别使用脂质体Lipofectamine 3000转染dsControl和dsP21-555.荧光实时定量PCR（RT-qPCR）及Western blotting分别检测分析p21 mRNA及蛋白的表达情况.流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布,使用细胞活力实验（MTS法）和集落培养实验分析细胞活力和增殖能力.结果 在ACHN和786-O细胞株中,dsP21-555组p21 mRNA的表达（2.86±0.33、1.96±0.35）相比dsControl组（1.05±0.34、1.01±0.14）,分别升高至2.72倍（t=7.640,P〈0.001）和1.95倍（t=5.058,P=0.002）.Western blotting实验证明两种细胞株中P21蛋白表达水平的上升与p21 mRNA上调相一致.FCM结果显示,转染dsP21-555后,细胞周期被阻滞在G0-G1期（57.08%±5.66%∶46.06%±4.60%,t=3.023,P=0.023;61.58%±6.23%∶42.25±6.08%,t=4.444,P=0.004）.MTS结果显示,转染dsP21-555后两种细胞的活力较dsControl组明显下降,其吸光度分别为0.85±0.20∶1.27±0.13,t=3.410,P=0.014;1.04±0.25∶1.55±0.10,t=3.758,P=0.009.集落培养实验显示,两细胞株dsControl组形成的集落数分别为110.91±26.21、129.89±22.87,dsP21-555组形成的集落数分别为59.37±14.23（t=3.456,P=0.014）、71.26±21.38（t=3.745,P=0.010）,表明dsP21-555组细胞增殖能力明显降低.结论 dsP21-555可明显上调肾透明细胞癌细胞中p21基因的表达,并显著抑制癌细胞的生长,提示dsP21-555可能成为一种新型的基因治疗工具.
- 黄耿姜卫东毛青桂定文
- 微小RNA-206通过干扰CDK4和GAK的表达对前列腺癌细胞生长的影响被引量：3
- 2017年
- 目的 探讨微小RNA-206（miR-206）对前列腺癌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和细胞周期素G相关蛋白激酶（GAK）表达的干扰作用及对前列腺癌细胞生长的影响.方法前列腺癌细胞株DU-145和PC-3为转染对象,转染miR-NC为对照组,转染miR-206为实验组.荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测CDK4和GAK mRNA的表达水平.Western blotting检测CDK4和GAK蛋白的表达水平.流式细胞术检测细胞周期分布.EdU增殖实验和集落形成实验检测细胞增殖能力.结果在DU-145和PC-3细胞株中,miR-NC组CDK4 mRNA表达量分别为1.00±0.09、1.00±0.10,GAK mRNA表达量为1.00±0.05、1.00±0.06;与之相比,两细胞株miR-206组中CDK4 mRNA表达明显下降,分别为0.36±0.18（t=6.572,P=0.001）、0.43±0.17（t=5.794,P=0.001）,GAK mRNA表达量亦明显下降,分别为0.23±0.04（t=22.420,P〈0.001）、0.32±0.08（t=14.500,P〈0.001）.Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致.流式细胞术检测结果显示,分别与两细胞株miR-NC组比较,转染miR-206后前列腺癌细胞在S期（23.60%±5.68%∶32.53%±4.52%,t=2.462,P=0.049;22.09%±4.35%∶30.96%±4.86%,t=2.720,P=0.035）和G2-M期（16.28%±7.12%∶26.63%±4.33%,t=2.484,P=0.048;14.60%±1.62%∶24.68%±7.13%,t=2.758,P=0.033）的细胞比例下降,在G0-G1期（60.13%±5.82%∶40.84%±5.37%,t=4.872,P=0.003;63.31%±3.27%∶44.36%±3.82%,t=7.533,P〈0.001）的细胞比例升高.EdU增殖实验结果显示,转染miR-206的细胞增殖能力明显减弱（22.56±3.81∶38.90±8.51,t=3.503,P=0.013;25.12±6.42∶48.45±8.92,t=4.244,P=0.005）.集落形成实验结果显示,两细胞株miR-NC组形成的集落数分别为218.66±44.59、177.35±24.49,miR-206组形成的集落数分别为125.38±32.80（t=3.370,P=0.015）、82.65±14.05（t=6.708,P=0.001）,提示miR-206组细胞增殖能力降低.结论 miR-206可通过干扰CDK4和GAK的表达显著抑制前列腺癌细胞的生长,提示miR-206可能成为前列腺癌的分子靶向治疗工具.
- 黄耿姜卫东毛青桂定文
- 关键词：微RNAS前列腺肿瘤
- miR-370-5p对前列腺癌细胞周期及增殖的影响被引量：2
- 2017年
- 目的研究miR-370-5p导入对前列腺癌细胞株DU-145和LNCaP细胞周期和增殖的影响。方法合成miR-370-5p(实验组)和ds Control(阴性对照组),分别转染至两个细胞株。利用Real-time PCR和Western blot法分别检测细胞转染后p21、CDK4、Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达变化。流式细胞术分析细胞周期变化,利用MTT法和集落形成实验分析细胞活力和增殖能力。结果 Real-time PCR结果提示,转染miR-370-5p后DU-145和LNCa P细胞中p21 mRNA水平分别上调3.43倍(P<0.01)和3.06倍(P<0.01),CDK4 mRNA水平分别下调0.51倍(P<0.01)和0.43倍(P<0.01),Cyclin D1 mRNA水平分别下调0.31倍(P<0.01)和0.35倍(P<0.01)。Western blot法检测结果符合这一趋势。流式细胞术检测结果显示,转染miR-370-5p后,位于S期和G_2/M期的细胞比例下降,位于G_0/G_1期的细胞比例则上升,说明细胞周期被阻滞在G_0/G_1期。MTT分析结果显示,与ds Control组相比,转染mi R-370-5p后,DU-145和LNCaP细胞活力明显降低。集落形成实验显示,miR-370-5p组的集落数数量明显较少,细胞增殖能力降低。结论 mi R-370-5p能显著激活前列腺癌细胞中p21蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞周期的进展和增殖。
- 黄耿姜卫东毛青桂定义
- 关键词：P21细胞周期增殖前列腺癌
