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刘博: 作品数：15 被引量：22H指数：3; 供职机构：山东省滨州畜牧兽医研究院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学自动化与计算机技术更多>>

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一种细胞培养用玻璃器皿清洁装置: 本实用新型一种细胞培养用玻璃器皿清洁装置，包括底座，底座顶部固定有清洗箱，清洗箱内左右两侧壁固定有清洗插板，清洗插板顶部均匀设置第一容器盛放槽，清洗箱内底部均匀设置有第二容器盛放槽，清洗箱内左右两侧壁之间位于第一容器盛放...; 王文秀刘博谷英华沈志强; 文献传递

猪视网膜上皮细胞系及其建立方法和应用: 本发明公开了猪视网膜上皮细胞系(WWX04‑PR)及其建立方法和应用，本发明猪视网膜上皮细胞易于培养，生长速度较快，能稳定传代，细胞活率高、纯度高且能很好保藏；通过无菌获取猪眼球组织分离获得高活力的原代猪视网膜细胞，然后...; 王文秀刘博谷英华魏凤谢金文沈志强

巴马香猪氨基肽酶N截短基因的克隆与原核表达被引量：1: 2017年; 为获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)受体猪氨基肽酶N(pAPN)抗原,提取巴马香猪小肠绒毛上皮的总RNA,PCR扩增获得pAPN基因的主要抗原区片段,并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,将重组质粒pET-32a-pAPN转化大肠埃希菌BL21,通过不同浓度的IPTG、不同诱导时间进行诱导表达,以确定目的蛋白表达的最佳条件。经SDS-PAGE和抗组氨酸标签的单抗进行Western blot检测重组蛋白在大肠埃希菌中的表达,结果显示,原核表达产物在诱导温度37℃、IPTG浓度为0.8mmol/L,诱导4h可获得最佳表达,产物分子质量约为45ku,获得的目的蛋白大小与预期一致。; 王文秀张艳王宝琴谢金文刘博沈志强; 关键词：克隆原核表达

永生化猪视网膜色素上皮细胞的建立及初步应用: 2024年; 【目的】建立永生化猪视网膜色素上皮细胞系,为病毒学研究提供一种新的细胞材料。【方法】合成猪腺病毒3型E1基因,将其克隆至真核表达质粒pCI-neo中,构建E1基因真核表达质粒pCI-neo-E1,进行PCR和测序鉴定。提取pCI-neo-E1质粒,转染原代猪视网膜色素上皮细胞,用新霉素G418筛选猪永生化视网膜色素上皮细胞系(RPECs)。检测RPECs的角蛋白18和19,通过细胞计数测定其生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,并对其进行染色体核型分析。分别将猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV77毒株、猪圆环病毒2型(PCV2)DBN-SX07株和猪伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株接种RPECs,同时将PEDV CV77毒株接种绿猴肾细胞(Vero细胞),将PCV2 DBN-SX07株接种猪肾细胞(PK15细胞),将PRV Bartha-K61株接种仓鼠肾成纤维细胞(BHK细胞),观察细胞病变效应(CPE),并采用间接免疫荧光法测定病毒的滴度。【结果】PCR和测序结果显示,真核表达质粒pCI-neo-E1构建成功。将pCI-neo-E1转染原代猪视网膜色素上皮细胞,经G418筛选得到永生化细胞株,该细胞株表达角蛋白18和19,传代50代仍保持上皮样细胞形态,增殖活性良好,细胞周期及染色体核型特征与正常的二倍体细胞一致。PEDV CV77毒株感染猪RPECs 24 h后,CPE明显,滴度为10^(5.25)TCID_(50)/mL,低于其在Vero细胞中的滴度(10^(8.125) TCID_(50)/mL)。PCV2 DBN-SX07毒株感染猪RPECs后可产生明显CPE,病毒滴度为10^(6.125)TCID_(50)/mL,略高于其在PK15细胞上的滴度(106.0 TCID_(50)/mL)。PRV Bartha-K61毒株感染猪RPECs后,CPE明显,病毒滴度为10^(8.75)TCID_(50)/mL,略低于其在BHK上的滴度(108.875 TCID_(50)/mL)。【结论】成功构建了永生化猪视网膜细胞系,可用于猪源病毒的培养,尤其是培养PCV2可产生明显CPE,易于观察,为后续开展疫苗工艺的提升提供了一种新的细胞材料。; 唐青海刘博谢金文谢金文魏凤高翠翠曹宗喜曹宗喜张艳; 关键词：永生化猪流行性腹泻病毒猪圆环病毒2型猪伪狂犬病毒

猪视网膜上皮细胞系及其建立方法和应用: 本发明公开了猪视网膜上皮细胞系(WWX04‑PR)及其建立方法和应用，该细胞系于2020年7月27日，本发明猪视网膜上皮细胞易于培养，生长速度较快，能稳定传代，细胞活率高、纯度高且能很好保藏；通过无菌获取猪眼球组织分离获...; 王文秀刘博谷英华魏凤谢金文沈志强

用于同时检测PEV和PTV的直接扩增荧光RT-PCR引物探针组和试剂盒及方法: 本发明公开了一种用于同时检测PEV和PTV的直接扩增荧光RT‑PCR引物探针组和试剂盒及方法，所述引物探针组包括4条不同的引物和2条不同的探针，其中，2条扩增PEV的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示；1...; 于新友王文秀李天芝唐娜刘博谢金文谷英华; 文献传递

猪NLRP3单克隆抗体制备及其抗原表位的鉴定被引量：3: 2022年; 为制备猪炎症小体NLRP3的特异性单克隆抗体(monoclonal antibodies,MAb),本研究将原核表达的可溶性重组蛋白NLRP3作为免疫原免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选获得了3株能稳定分泌NLRP3蛋白的杂交瘤细胞株9H5、13E1、15E2,鉴定了抗体亚类,将目的蛋白逐步截短后鉴定出了单克隆抗体识别的抗原表位区域。结果表明,MAb 9H5和15E2识别的抗原表位序列在1~57 aa之间,MAb 13E1识别的表位序列在115~186 aa之间。免疫荧光、Western blot和亚类鉴定试验显示,杂交瘤细胞产生的抗体均可与NLRP3及重组蛋白特异性结合,9H5、13E1、15E2的重链亚型均为IgG 2b,轻链分别为λ、λ和κ链。本研究成功制备了猪NLRP3的单克隆抗体,为进一步研究猪炎症小体NLRP3的功能提供工具。; 刘博霍芳霍芳刘海隆张莹蔡青云谷英华张艳王文秀; 关键词：单克隆抗体

猪肺炎支原体主要保护性抗原的研究进展被引量：9: 2018年; 猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是猪支原体肺炎(Mycoplsamal pneumonia of swine,MPS)的原发性病原,广泛流行于世界各地,对养猪业造成重大经济损失。MPS发病率高,死亡率低,主要导致猪慢性咳嗽,生长率降低,饲料转换率下降,体重增长缓慢。另外,MPS使宿主易感其他呼吸系统病原,从而造成继发感染。由于对具有良好免疫原性的Mhp特异性蛋白缺少深入研究,使得Mhp研究受到一定限制,从而影响了对MPS的控制。文章围绕Mhp主要黏附因子、膜蛋白及细胞质蛋白等主要保护性抗原蛋白予以综述,以期为MPS疾病诊断、监测和相关疫苗研究提供科学依据。; 王文秀王宝琴徐晴晴刘博张艳; 关键词：猪肺炎支原体膜蛋白疫苗

猪伪狂犬病病毒gD和gE蛋白间接ELISA检测方法的建立及联合应用被引量：2: 2022年; 为建立一种能够快速鉴别检测猪伪狂犬病毒(PRV)疫苗免疫抗体和野毒抗体的方法,分别对PRV的gD蛋白和gE蛋白进行原核表达,以其重组蛋白作为检测抗原分别建立了gD-间接ELISA方法和gE-间接ELISA方法,并联合应用两种检测方法对临床血清样品进行检测。结果表明:获得了以包涵体形式表达的重组gD蛋白和重组gE蛋白,经Western blot检测表明两种重组蛋白均具有良好的免疫学活性;gD-间接ELISA方法和gE-间接ELISA方法检测PRV阳性血清的最低检出效价分别为1:25600和1:12800,gD-间接ELISA方法检测PRRSV、CSFV、PPV、PCV-2、PEDV、TGEV阳性血清均为阴性;gE-间接ELISA方法检测PRV疫苗免疫血清以及PRRSV、CSFV、PPV、PCV-2、PEDV、TGEV阳性血清均为阴性;建立的gD和gE蛋白的两种间接ELISA方法的批内和批间重复性试验的变异系数分别小于5%和7%;联合应用gD-间接ELISA方法和gE-间接ELISA方法检测2156份临床血清样品,PRV抗体阳性率为88.96%,PRV野毒抗体阳性率为4.04%,PRV免疫抗体阳性率为84.93%。说明建立的gD-间接ELISA方法和gE-间接ELISA方法均具有良好的敏感性、特异性、重复性,两种方法的联合应用实现了PRV免疫抗体和野毒抗体的鉴别检测。; 林东文王宝琴张艳刘博王文秀; 关键词：猪伪狂犬病间接ELISA 免疫抗体

一种细胞培养装置: 本实用新型公开了细胞培养领域的一种细胞培养装置，该处理装置包括有箱体和底板，所述底板设于箱体底端，所述箱体前壁设有箱门，所述箱体内腔上部设有活动板，所述活动板两端与箱体内壁滑动连接，所述活动板顶端左右两侧对称连接有弹簧，...; 王文秀刘博徐晴晴沈志强

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