刘旭旭
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 供职机构：西南大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金中国烟草总公司科技项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 番茄SYTA的克隆及表达分析被引量：7
- 2017年
- 【目的】克隆获得番茄 SYTA (Solanum lycopersicum SYTA，S.l SYTA),分析其基因序列生物信息学特征和预测蛋白的结构特征,明确S.l SYTA亚细胞定位和组织表达,并分析其在绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标记的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)侵染下的表达变化及其对TMV移动的影响,为明确S.l SYTA在植物病毒侵染致病过程中的作用提供理论依据。【方法】根据番茄基因组含有的SYTA同源基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计克隆引物,采用RT-PCR技术克隆S.l SYTA全长序列;应用生物信息学方法分析该基因的序列特征;使用MEGA 7.0对S.l SYTA蛋白序列及其同源序列进行多序列比对,并构建同源物种间系统进化树;通过与GFP蛋白融合进行亚细胞定位;利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测番茄各部位S.l SYTA的表达量以及在TMV胁迫的番茄中S.l SYTA的表达变化;构建植物瞬时表达载体p CV-SYTA-m GFP,通过农杆菌介导在本氏烟草中瞬时表达,TMV-GFP攻毒,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测在本氏烟中瞬时表达S.l SYTA时TMV-GFP的积累和移动情况。【结果】克隆得到1 620 bp的S.l SYTA基因开放阅读框全长,序列比对及生物信息学分析表明,其编码的氨基酸序列具有SYTs家族的典型特征,含有N端的跨膜区、胞间连接区和C端的两个C2结构域;多序列对比及系统进化树分析发现,与茄科林生烟草、绒毛状烟草等植物亲缘关系较近,与黄瓜较远;亚细胞定位显示S.l SYTA定位于细胞质膜。在番茄的根、茎和叶中S.l SYTA的表达量从高到低依次为根>叶>茎;TMV-GFP侵染番茄导致其S.l SYTA表达量在接种后第1天显著上调,在第7天降至正常水平。在S.l SYTA瞬时表达的本氏烟叶片部位接种TMV-GFP,TMV-GFP在接种第5天时已经到达新叶,而接种部位仅表达空载体对照的本氏烟新叶中未观察到TMV-GFP,且接种第5天时TMV-GFP在接种叶和新叶中的积累量�
- 潘琪刘旭旭彭浩然蒲运丹张永至叶思涵吴根土青玲孙现超
- 关键词：番茄克隆
- 番茄SYTA克隆分析
- SynaPtotagmin（Syt突触囊泡结合蛋白）是一个广泛存在于内分泌及神经细胞上的蛋白质家族（Matthew,1981）。哺乳动物及拟南芥中均发现有多种亚型（Chapman E.R.,2002:Craxton M....
- 刘旭旭刘世超杜利娟孙现超
- 文献传递
- 四川烟区CMV和PVY株系分化研究被引量：7
- 2017年
- 为了明确当前四川烟区蚜传病毒的株系分化情况,该研究利用RT-PCR技术对四川烟区的CMV和PVY两种蚜传病毒病进行了检测和鉴定.依据病毒的CP基因序列合成引物,以烟草病叶的总RNA为模版,RT-PCR扩增得到了657bp的CMVCP片段和759bp的PVYCP片段,获得的基因片段连接到pGEM-T Easy载体上,测序.样品检测结果显示,在252份样品中CMV和PVY的检出率分别为33.33%和34.52%,两者复合侵染率为15.87%.构建的系统发育树分析结果表明,四川烟区的CMV株系分化不明显,主要属于IB亚组.PVY有着明显的株系分化现象,PVY^(N:O)株系、PVY^O株系、PVY^N株系在四川烟区均有发生.研究结果可能对培育抗病品种,控制这两种蚜传病毒具有一定的参考价值.
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- 关键词：烟草植株黄瓜花叶病毒马铃薯Y病毒株系
