马玉飞
- 作品数：8 被引量：24H指数：2
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- 一种猪病毒性腹泻病原的多重液相芯片检测方法及其构建
- 一种猪病毒性腹泻病原的多重液相芯片检测方法及其构建，根据猪病毒性腹泻病原的基因序列，筛选出合适的TAG序列，偶联于微球；将TAG互补序列标记于各病原PCR引物的上游引物5’端，并在PCR引物的下游引物5’端标记生物素；然...
- 刘惠莉陶洁李本强马玉飞程靖华石迎饶柏钟
- 文献传递
- 猪源BVDV-2Npro和Erns点突变对细胞抗病毒反应的影响
- 陶洁马玉飞李本强程靖华刘惠莉
- 猪源牛病毒性腹泻病毒1型分离株的鉴定及培养特性研究被引量：3
- 2017年
- 利用RT-PCR方法从猪场腹泻样品中检测到牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核酸阳性样品,测序证实为1型BVDV,命名为SHCM06。遗传进化分析表明,其与ZM-95亲缘性最近,同源性达98.3%;与BVDV-1经典毒株亲缘性较远,仅85.7%~89.8%。免疫荧光、Western-blot和荧光定量RT-PCR检测均表明,SHCM06毒株可感染MDBK、ST和PK15细胞,在MDBK和ST细胞上的增殖效率显著高于PK15细胞。进一步分析SHCM06感染对细胞中Ⅰ型干扰素表达的影响,结果显示,SHCM06感染均能使3种细胞中IFN-α和IFN-β表达量显著下降(P<0.05),且对MDBK细胞IFN-α的抑制效果显著高于对PK15细胞中IFN-α的抑制作用(P<0.05)。结果表明,从猪临床腹泻样品中分离1株BVDV1型,该病毒对MDBK、ST细胞适应性好于PK-15细胞,能显著抑制细胞中Ⅰ型IFN的产生,以发挥抵抗细胞抗病毒免疫效应,本试验为深入研究猪源BVDV的致病作用奠定了基础。
- 陶洁李本强李本强马玉飞程靖华
- 关键词：同源性分析
- 猪繁殖与呼吸综合征活疫苗与LT蛋白配伍经黏膜途径接种小鼠免疫效果分析被引量：1
- 2018年
- 旨在评价猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)活疫苗与大肠杆菌热敏性肠毒素(LT)蛋白配伍后经滴鼻途径接种小鼠后的免疫应答水平,分析猪繁殖与呼吸综合征活疫苗经黏膜途径免疫的可行性。试验共分为四组,分别为对照组、PRRSV滴鼻组、PRRSV+LT滴鼻组和PRRSV注射组。一免、二免后检测血清Ig G和鼻拭子Ig A抗体水平,同时检测IFN-γ和IL-10细胞因子的表达。结果表明:二免后,PRRSV+LT滴鼻组可产生较高水平的Ig G抗体,与PRRSV注射组无显著差异; PRRSV+LT滴鼻组产生的Ig A抗体水平明显高于PRRSV注射组; PRRSV+LT滴鼻组小鼠脾脏IFN-γ、IL-10水平与PRRSV注射组无显著差异。因此,猪繁殖与呼吸综合征活疫苗与LT蛋白经滴鼻途径免疫小鼠,可产生理想的黏膜免疫应答及系统的体液免疫和细胞免疫反应。黏膜分泌性抗体的产生,为阻断病毒局部感染提供了保护屏障,能更有效达到抵抗病毒入侵及感染的目的。
- 李本强陶洁陶洁马玉飞程靖华刘惠莉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征滴鼻免疫
- 一种猪病毒性腹泻病原的多重液相芯片检测方法及其构建
- 一种猪病毒性腹泻病原的多重液相芯片检测方法及其构建，根据猪病毒性腹泻病原的基因序列，筛选出合适的TAG序列，偶联于微球；将TAG互补序列标记于各病原PCR引物的上游引物5’端，并在PCR引物的下游引物5’端标记生物素；然...
- 刘惠莉陶洁李本强马玉飞程靖华石迎饶柏钟
- 文献传递
- 猪7种腹泻相关病毒的临床检测及猪嵴病毒的遗传进化分析被引量：20
- 2017年
- 为了解引起猪腹泻疫病的病毒性病原种类及感染现状,本研究首先针对7种报道较少但可引起猪腹泻的病毒性病原建立了多重RT-PCR检测方法,包括猪捷申病毒(PTV)、猪萨佩罗病毒(PSV)、猪丁型冠状病毒(PDCo V)、猪嵴病毒(PKV)、猪札幌病毒(PSa V)、猪星状病毒(PAst V)和猪环曲病毒(PTo V)。利用该方法对419份临床腹泻粪便样品进行筛检,结果显示PKV检出率最高,阳性率达26.98%–45.79%;PKV和其他病原混合感染率达9.52%–18.54%。基于PKV的高检出率及其可能在猪腹泻疾病中发挥的作用,本试验进一步选取3个PKV阳性样品进行全基因组序列测定及遗传进化分析。结果表明,这3个阳性样品PKV均归属于猪嵴病毒属,且与其他动物嵴病毒遗传距离较远,分别标记为CM-PKV、JS-PKV和PD-PKV;它们的全基因组同源性为88.1%–89.1%;CM-PKV与2013年报道的中国株JS-02a-CHN/2013同源性最高,而JS-PKV和PD-PKV则与2008年报道的匈牙利株K-30-HUN/2008/HUN同源性最高。表明上海不同地区猪群中存在的PKV有明显的遗传差异,但毒株遗传特性的差异与其致病力的相关性需进一步研究。本研究为深入了解PKV的流行现状及探讨其在猪腹泻疫情中的作用提供了参考。
- 孟丽陶洁李本强马玉飞程靖华张春玲刘惠莉
- 关键词：多重RT-PCR全基因组序列遗传进化分析
- 猪Delta冠状病毒的流行病学调查及M基因序列分析
- 2020年
- 为了解猪Delta冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)在发生腹泻疫情猪群中的感染情况,根据PDCoV M基因的保守序列设计了一对RT-PCR检测引物,建立了猪Delta冠状病毒的RT-PCR的检测方法,其最低核酸检测限量为3.92×10^3 copies/μL,特异性和灵敏度均较好。利用该方法对2015—2017年上海周边猪场的518份猪腹泻粪便样品进行检测,检测出25份PDCoV阳性样品,感染阳性率达4.8%。在所检出的阳性样本中,PDCoV与猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)和猪星状病毒(porcine astrovirus,PAstV)的混合感染率较高,分别为40%和48%;PDCoV与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)混合感染率为8.0%,未检测到PDCoV与猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TEGV)混合感染的样本。随机选取10份PDCoV阳性样本,对扩增的M基因片段同源性进行分析,结果,10份样品中核苷酸同源性达95.0%—99.6%,与GenBank登录的PDCoV毒株的同源性为96.1%—100%,说明目前流行的PDCoV毒株的遗传差异不大,该研究为了解PDCoV流行情况提供了参考依据。
- 马玉飞李本强李本强陶洁程靖华刘惠莉
- 关键词：RT-PCR进化分析
- 猪7种腹泻病毒多重PCR检测方法的建立与应用
- <正>引言近年来,猪腹泻疫病给养殖业带来了巨大损失。引起猪腹泻疫情的重要病毒性病原包括猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Porcine tr...
- 马玉飞李本强陶洁程靖华刘惠莉
- 文献传递
